ю
калибровочного файла.

5. Основные этапы создания калибровочного файла.

5.1. В основном меню программы "Бак Трак" выбрать
раздел "Работа с данными" (Data functions).

5.2. В меню "Работа с данными" (Data functions) выбрать
соответствующие файлы исследования (не менее 50 проб) питьевой воды в разделе
"Выбор файлов" (Select files).

5.3. В меню "Работа с данными" (Data functions) выбрать
раздел "Построение калибровочного файла" (Correlation).

5.4. Указать "Пороговое значение" (Thresholds) для
М-параметра или Е-параметра, по которому будет проводиться построение
калибровочной кривой. Как правило, для построения калибровочной кривой
используется М-параметр, численное значение которого 5%.

5.5. После задания порогового значения М-параметра необходимо
вычислить корреляцию (Calculate).

5.6. Если коэффициент корреляции r превышает значение (-0,85), то
данная калибровочная кривая показывает высокую степень корреляции и отвечает
требованиям (рис. 5.1, 5.2) <*>.

    --------------------------------

<*> Здесь и далее рисунки не приводятся.

 

5.6.1. Указать "Пороговое значение по времени"
(Time-Limits). Для этого в полученное уравнение регрессии (уравнение
калибровочной кривой) необходимо подставить максимально допустимое значение
определяемого показателя (ОМЧ, колииндекс и т.д.), регламентированное в данном
случае СанПиН 2.1.4.1074-01 "Питьевая вода. Гигиенические требования к
качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль
качества". Далее следует вычислить логарифм определяемого показателя и
определить из уравнения значение времени - (t). Это и есть величина
"Порогового значения по времени" - Time Limits.

5.6.2. Теперь данная калибровочная кривая записывается на диск
(Disk) в виде калибровочного файла (Filename).

5.6.3. При необходимости вносится дополнительный комментарий
(Comment) для детального описания калибровочного файла.

5.7. Если коэффициент корреляции r не превышает (-0,85), то
необходимо более детально проанализировать полученную зависимость. Как правило,
прослеживается общая тенденция: большинство точек находится вблизи
калибровочной кривой, и имеются лишь отдельные "точки-выбросы",
которые расположены вдали от калибровочной кривой (рис. 5.3). В этом случае
необходимо "точки-выбросы" исключить. Это приведет к существенному
повышению коэффициента корреляции r.

6. После создания калибровочного файла необходимо выбрать данный
файл при задании пороговых значений (Thresholds) в главном меню программы
"Бак Трак" для автоматического подсчета величины определяемого
показателя.

 

6. Питательные среды: назначение, приготовление,

использование

 

Питательные среды, используемые в импедансной микробиологии, специально
разработаны фирмой SY-LAB (Австрия) <*> для системы "Бак Трак".
Селективность фирменных питательных сред позволяет определять
микробиологические показатели качества питьевой воды систем централизованного
водоснабжения в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.4.1074-01 "Питьевая
вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем
питьевого водоснабжения. Контроль качества".

    --------------------------------

<*> Питательные среды BiMedia 001A и BiMedia 160B
выпускаются также отделением питательных сред Государственного научного центра
прикладной микробиологии (Московская область, г. Оболенск).

 

Эти среды обладают всеми свойствами, необходимыми для измерения
импеданса:

- ровная базовая линия с небольшим или нулевым дрейфом или шумом
в присутствии инокулюма;

- высокая начальная скорость изменения электрического сигнала,
дающая резкий перегиб в точке определения;

- большая величина тотальных электрических изменений.

Для санитарно-микробиологического анализа питьевой воды
используются следующие питательные среды:

- BiMedia 001A - для определения общего числа микроорганизмов;

- BiMedia 160B и 160C - для определения колиформных бактерий;

- BiMedia 660A - для определения сульфитредуцирующих клостридий.

 

6.1. Приготовление сред

 

6.1.1. BiMedia 001A - для определения мезофильных аэробных и
факультативно анаэробных микроорганизмов (общее число микроорганизмов) и
BiMedia 160B - для определения колиформных бактерий (общих и термотолерантных):

- растворить необходимое количество среды в дистиллированной воде
(соотношение указано на упаковке);

- разделить приготовленную среду на порции и автоклавировать при
1 атм. 15 мин.;

- после стерилизации среда должна уравновеситься при комнатной
температуре в течение 6 ч.

Примечание. Приготовленная среда должна храниться при температуре
4 °C. Срок хранения - 3 недели. Изменение режима стерилизации (более
продолжительное автоклавирование) снижает качество среды!

 

6.1.2. Приготовление среды BiMedia 660A - для определения сульфитредуцирующих
клостридий:

- растворить все содержимое упаковки в дистиллированной воде
(конечный объем - 1,2 или 5 л указан на этикетке);

- проверить pH среды и, если необходимо, довести до 7,1 +/- 0,1;

- разлить приготовленную среду на порции и стерилизовать при 1
атм. 15 мин.;

- дать среде уравновеситься в течение 12 ч при комнатной
температуре перед использованием;

- внести по 9 мл среды в стерильные измерительные ячейки и
поместить ячейки в штатив;

- прогреть измерительные ячейки (с приоткрытыми крышками) при 95
- 100 °C на пару в течение 15 мин. (для удаления растворенного в среде
кислорода);

- дать среде остыть до 50 °C (или меньше), затем можно добавлять
аддитив;

- добавить во флакон с Аддитивом 660A 1,5 мл стерильной
дистиллированной воды;

- добавить по 30 мкл раствора аддитива в каждую измерительную
ячейку с 9 мл среды.

Для предотвращения образования воздушных пузырьков не погружайте
наконечники пипетки в среду.

Примечание. Аддитив необходимо добавлять только непосредственно
перед использованием среды. Хранить аддитив при 4 °C.

 

Растворы аддитивов следует хранить не более 2 недель.

Приготовленная среда должна храниться при 4 °C не более 2 недель.

Длительное прогревание и обработка при температуре выше
рекомендуемой снижают качество среды!

 

7. Методика тестирования и обработки

измерительных ячеек

 

7.1. Методика тестирования измерительных

ячеек прибора "Бак Трак"

 

Необходимо каждые несколько месяцев проводить тестирование
используемых измерительных ячеек для контроля регистрируемых показателей -
изменения проводимости среды (М-параметр) и изменения проводимости электродов
(Е-параметр).

Для этого необходимо:

1. В стерильные измерительные ячейки налить 10 мл или 100 мл
стерильного физиологического раствора (в зависимости от объема ячеек).

2. Установить время исследования (Duration) - 24 ч.

3. Установить пороговое значение (Threshold) для М-параметра -
5%.

4. Установить значение Time limit - 23 ч.

5. Начать измерение (Start measurement).

6. После того, как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как
свободная (Empty), поместить в инкубаторный блок измерительные ячейки с
физиологическим раствором.

Учет результатов тестирования.

Если за время тестирования измерительных ячеек значения
М-параметра не превысили 5%, то ячейки пригодны для дальнейшей работы.

Если за время тестирования в ячейках значение М-параметра
превысило 5%, то цвет ячейки на экране монитора изменится на красный, что
означает "проба загрязнена" (Contaminated). В этом случае необходимо
повторно тестировать такую ячейку, предварительно поместив ее в любое другое
место в инкубаторном блоке. При повторном получении аналогичных результатов
(пересечение 5% значения М-параметра) необходимо заменить измерительные ячейки
на новые.

 

7.2. Методика обработки измерительных ячеек

прибора "Бак Трак"

 

7.2.1. Обработка измерительных ячеек

 

1. Приоткрыть пластиковые крышки измерительных ячеек и поместить
измерительные ячейки в металлический штатив. Не автоклавировать плотно закрытые
ячейки!

2. Стерилизовать измерительные ячейки при 1 атм. в течение 20 -
30 мин.

3. При наличии патогенных микроорганизмов использовать режимную
стерилизацию.

4. После автоклавирования дать ячейкам остыть до комнатной
температуры.

5. Открыть измерительные ячейки и промыть их дистиллированной
водой.

6. Если исследуемый продукт имел жирную консистенцию, то
выдержать ячейки в растворе с мягким нейтральным моющим средством (например,
хозяйственное мыло) в течение 30 мин.

7. При необходимости промыть измерительные ячейки мягким ершиком
так, чтобы не повредить электроды.

8. Если на дне измерительной ячейки остался какой-либо осадок, то
его необходимо удалить.

9. Тщательно промыть измерительные ячейки 3 раза водопроводной
водой и 2 раза дистиллированной водой.

10. Если между уплотнительными кольцами в донной крышке появилась
вода, то необходимо разобрать измерительные ячейки и просушить их в разобранном
виде в сушильном шкафу при 60 °C в течение 40 мин.

11. Собрать ячейки, верхнюю крышку плотно не закрывать!

12. Измерительные ячейки автоклавировать при 1 атм. в течение 15
мин.

Теперь измерительные ячейки готовы к использованию.

Примечание. Никогда не используйте моющие средства, содержащие
хлор. Тщательно промывайте ячейки, поскольку образование пленок на поверхности
электродов вызывает шумы при прохождении сигнала.

 

7.2.2. Стерилизация измерительных ячеек

 

1. Приоткрыть пластиковые крышки измерительных ячеек.

2. Поместить измерительные ячейки в металлический штатив.

Не автоклавировать плотно закрытые ячейки!

3. Разместить штатив с измерительными ячейками в верхней части
автоклава для предотвращения попадания воды в ячейки.

4. Стерилизовать измерительные ячейки при 1 атм. в течение 20
мин.

Никогда не стерилизовать ячейки в сухожаровом шкафу!

5. Достать измерительные ячейки из автоклава, как только это
станет возможным (~ 70 - 85 °C).

Высушить ячейки при комнатной температуре.

6. Если между уплотнительными кольцами в донной крышке появилась
вода, то необходимо разобрать измерительные ячейки и высушить их в разобранном
виде в сушильном шкафу при 60 °C в течение 40 мин.

7. Убедитесь, что ячейки полностью высохли. При необходимости
просушите измерительные ячейки еще раз.

Теперь измерительные ячейки готовы к использованию.

Примечание. Возможна стерилизация измерительных ячеек с внесенной
в них питательной средой.

 

Библиографические данные

 

1. Водный кодекс Российской Федерации от 16.11.95.

2. Руководство по контролю качества питьевой воды. Женева: ВОЗ,
1994. Т. 1.

3. Временные методические рекомендации по использованию
питательных сред, предназначенных для микробиологического экспресс-анализатора
"Бак Трак 4100". М., 1995.

4. Методические рекомендации по проведению бактериологических
исследований питьевой воды с использованием микробиологического
экспресс-анализатора "Бак Трак 4100". М., 1996.

5. Подунова Л.Г., Кривопалова Н.С., Сорокина Р.С. и др.
Экспресс-метод бактериологического контроля за качеством питьевой воды //
Стендовый доклад II Международного конгресса "Вода: Экология и
технология" ЭКВАТЭК-96. М., 1996.

6. Определитель бактерий Берджи / Под редакцией Дж. Хоулта, Н.
Крига, П. Снита, Дж. Стейли и С. Уилльямса. М.: "Мир", 1997. Т. 1.

7. Атанов А.Н., Белова М.А., Гумен С.Г. Применение системы
"Бак Трак 4100" // Водоснабжение и санитарная техника. 1998, N 10. С.
25 - 27.

8. Недачин А.Е., Артемова Т.З., Талаева Ю.Г., Рахманин Ю.А. и др.
// Тезисы докладов IV Международного конгресса "Вода: Экология и
технология" ЭКВАТЭК-2000. М., 2000. С. 760 - 761.

9. Пивоваров Ю.П., Королик В.В. Санитарно-значимые микроорганизмы
(таксономическая характеристика и дифференциация). М., 2000.

10. Noble P.A., Ashton Е., Davidson С.A., Albritton W.L.
Heterotrophic plate counts of surface water samples by using impedance methods.
Applied and Environmental Microbiology 57 (11), 1991. С. 3287 - 3291.

11. Futschik K. Bac Trac 4100 Impedance-splitting method //
Technical University of Vienna, Institute of Electrotechnical Principles and
Theory, 1992. Р. 1 - 8.

12. Denner E.В.М. The Bac Trac 4100, a New Impedance Measuring
System for the Rapid Detection of Microorganisms // BACTRAC Seminar. Moscow,
October, 1995. Р. 1 - 31.

13. Colquhoun K.O., Timms S., Fricker C.R. Detection of
Escherichia coli in potable water using direct impedance technology // Journal
of Applied Bacteriology, 1995, 79. Р. 635 - 639.

14. Futschik K., Pfutzner H., Nussbaaum C. Selective detection of
microorganisms by use of electrode impedance // IX International conference on
electrical bio-impedance. September 26 - 30, 1995. Heidelberg, Germany. Р. 79 -
82.