при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 +/- 2 часов.

Постановка тестов проводится в соответствии с требованиями МУК
4.2.1018-01 "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды".

 

4.2.2. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий
прямым методом с использованием измерительных ячеек объемом 100 мл

 

1. Концентрированная среда BiMedia 160B (5-кратной концентрации)
<*>.

    --------------------------------

<*> Для приготовления концентрированной среды навеска
сухого препарата среды увеличивается в 5 раз, а объем дистиллированной воды
остается прежним.

 

2. Протокол измерения.

2.1. Установить температуру 37 °C на приборе "Бак
Трак".

2.2. Установить в основном меню программы прибора параметры.

Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters):

Время исследования (Duration) - 24 ч.

Масштаб измерений (Scale):

- М-параметр 0 - 50%;

- Е-параметр 0 - 50%.

Время задержки (Delay) - 1 ч.

3. Установка пороговых значений (Thresholds):

3.1. В случае использования калибровочного файла для исследования
питьевой воды параметры пороговых значений вносятся автоматически (имеется
коммерческий калибровочный файл для исследования питьевой воды на колиформные
бактерии - COLI.COR).

3.2. В отсутствии калибровочного файла одновременно с посевом
исследуемого образца воды на среду BiMedia 160B производится определение
колиформных бактерий классическим методом мембранных фильтров в соответствии с
МУК 4.2.1018-01 "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды".

Результаты, полученные при классическом методе исследования,
вносят в соответствующий файл (MAIN MENU/DATA FUNCTIONS/ENTER VALUES). Основные
этапы создания калибровочного файла рассмотрены в разделе 5 данных указаний.

4. Поместить 100 мл исследуемого образца воды в измерительную
ячейку прибора объемом 100 мл.

5. Добавить в каждую измерительную ячейку по 20 мл
концентрированной среды BiMedia 160B.

6. Для контроля среды используют одну измерительную ячейку со 100
мл стерильной дистиллированной воды и 20 мл концентрированной среды BiMedia
160B.

7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (START
MEASUREMENT) и начать измерения.

8. После того, как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как
свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Бак
Трак".

Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в
прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT)
будут записаны автоматически.

При наличии в исследуемом образце воды единичных клеток
колиформных бактерий изменение сигнала импеданса превышает 5%-ное пороговое
значение по М-параметру менее чем за 16 часов.

При положительном результате наблюдается также изменение цвета
питательной среды с исходного пурпурного до желтого.

При использовании калибровочного файла результат исследования
выдается автоматически в виде количества колиформных бактерий в исследуемом
объеме воды.

Из ячеек с признаками роста колиформных бактерий делают высев
петлей на чашки Петри со средой Эндо для постановки оксидазного теста и
определения ферментации лактозы при (44 +/- 0,5) °C с целью подтверждения
наличия или отсутствия термотолерантных колиформных бактерий в исследуемой
пробе. Посевы на среде Эндо инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение
(24 +/- 2) ч.

Постановка тестов проводится в соответствии с МУК 4.2.1018-01.

 

4.2.3. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий
титрационным методом

 

Определение колиформных бактерий титрационным методом проводится
в соответствии с МУК 4.2.1018-01 "Санитарно-микробиологический анализ
питьевой воды" на приборе после этапа подращивания засеянных объемов пробы
анализируемой воды в средах накопления.

Сущность метода заключается в посеве определенных объемов
анализируемой пробы воды в жидкую питательную среду для накопления бактерий с
последующим высевом в измерительную ячейку прибора.

1. Среда BiMedia 160B, приготовленная в соответствии с
требованиями инструкции изготовителя.

2. Протокол измерения.

2.1. Установить температуру 37 °C на приборе "Бак
Трак".

2.2. Установить в основном меню программы прибора параметры.

Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters):

Время исследования (Duration) - 24 ч.

Масштаб измерений (Scale):

- М-параметр 0 - 50%;

- Е-параметр 0 - 50%.

Время задержки (Delay) - 1 ч.

3. Установка пороговых значений:

Пороговые значения (Thresholds):

- М-параметр 5%;

- Е-параметр 10%.

Проводить учет результатов по М-параметру.

Пороговое значение по времени (Time limit) - 3 ч.

4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды BiMedia
160B.

5. Внести 1 мл из каждого объема с признаками роста в среде
накопления в 9 мл среды BiMedia 160B.

6. Для контроля среды использовать одну измерительную ячейку с 10
мл среды BiMedia 160B (без инокулята).

7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (START
MEASUREMENT) и начать измерения.

8. После того, как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как
свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Бак
Трак".

Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в
прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT)
будут записаны автоматически.

При наличии в засеянных после накопления объемах колиформных
бактерий сигнал импеданса превышает 5%-ное пороговое значение по М-параметру в
течение 3 ч.

При положительном результате наблюдается также изменение цвета
питательной среды с исходного пурпурного на желтый.

Для постановки оксидазного теста и определения ферментации
лактозы при (44 +/- 0,5) °C с целью подтверждения наличия или отсутствия термотолерантных
колиформных бактерий в исследуемой пробе из засеянных объемов с признаками
роста в среде накопления делают высев петлей на среду Эндо. Посевы инкубируют
при (37 +/- 1) °C в течение (18 +/- 20) ч.

Постановка тестов проводится в соответствии с МУК 4.2.1018-01
"Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды".

Для ускорения получения результатов на присутствие
термотолерантных колиформных бактерий допустимо проводить высев 1 мл из объема
среды накопления, где отмечено помутнение и газообразование, в измерительную
ячейку "Бак Трак" с 9 мл среды BiMedia 160B и инкубировать при режиме
(44 +/- 0,5) °C по вышеописанному протоколу измерения.

Учет результатов титрационного метода ведется в соответствии с
МУК 4.2.1018-01, раздел 8.3.5.

 

4.3. Определение спор сульфитредуцирующих
клостридий

 

Сущность метода заключается в концентрировании определенного
объема исследуемого образца воды с использованием мембранных фильтров и
последующем тестировании на приборе "Бак Трак".

1. Среда BiMedia 660A (готовится в соответствии с инструкцией
фирмы-изготовителя).

2. Протокол измерения.

2.1. Установить температуру 43 °C на приборе "Бак
Трак".

2.2. Установить в основном меню программы прибора параметры.

Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters):

Время исследования (Duration) - 24 ч.

Масштаб измерений (Scale):

- М-параметр 0 - 50%;

- Е-параметр 0 - 50%.

Время задержки (Delay) - 1 ч.

Пороговые значения (Thresholds):

- М-параметр 5%;

- Е-параметр 10%.

Проводить учет результатов по М-параметру.

Пороговое значение по времени (Time limit) - 23 часа.

Определение сульфитредуцирующих клостридий необходимо проводить,
используя измерительные ячейки для анаэробов.

3. Добавить в каждую измерительную ячейку по 10 мл питательной
среды BiMedia 660A.

4. Отфильтровать соответствующее количество исследуемого образца
воды (20 мл), в котором не допускается наличия спор сульфитредуцирующих
клостридий, и поместить фильтр в измерительную ячейку со средой.

5. Для контроля питательной среды используют одну измерительную
ячейку с 10 мл среды BiMedia 660A.

6. Поместить измерительные ячейки с образцами исследуемых проб
воды и контролем питательной среды в штатив и прогреть на водяной бане при
температуре (75 +/- 5) °C в течение 15 мин.

7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (START
MEASUREMENT) и начать измерения.

8. После того, как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как
свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Бак
Трак".

Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в
прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT)
будут записаны автоматически.

Учет результатов

Образец загрязнен спорами сульфитредуцирующих бактерий, если
изменение импеданса превышает 5%-ное пороговое значение по М-параметру и
10%-ное пороговое значение по Е-параметру в течение 23 часов.

При положительном результате на стенках измерительной ячейки
должен обнаруживаться выпавший осадок черного цвета.

Примечания. Определение возможно проводить, используя обычные
измерительные ячейки и парафиновое масло.

Для этого необходимо добавить в каждую измерительную ячейку по 9
мл питательной среды BiMedia 660A и 1 мл парафинового масла (как покрывающий
слой) и автоклавировать ячейки с внесенной в них питательной средой и
парафиновым маслом (крышки должны быть приоткрыты!).

 

4.4. Прямой метод определения колифагов

 

Определение колифагов в воде проводится в измерительных ячейках
объемом 100 мл.

1. Среда BiMedia 001A десятикратной концентрации <*>.

    --------------------------------

<*> Для приготовления концентрированной среды навеска
сухого препарата среды увеличивается в 10 раз, а объем дистиллированной воды
остается прежним.

 

2. Протокол измерения.

2.1. Установить температуру 37 °C на приборе "Бак
Трак".

2.2. Установить в основном меню программы прибора параметры.

Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters):

Время исследования (Duration) - 24 ч.

Масштаб измерений (Scale):

- М-параметр 0 - 50%;

- Е-параметр 0 - 50%.

Время задержки (Delay) - 1 ч.

Пороговые значения (Thresholds):

- М-параметр 5%;

- Е-параметр 10%.

Учет результатов проводится по М-параметру.

3. Отфильтровать 100 мл исследуемой пробы воды через фильтр для
микробиологических целей с диаметром пор не более 0,45 мкм.

4. Фильтрат поместить в измерительную ячейку с 10 мл
концентрированной среды BiMedia 001A.

5. Внести 1 мл, 0,1 мл и 0,01 мл свежей ночной культуры
чувствительного к фагу штамма Е.coli <*> в измерительные ячейки с
отфильтрованными образцами воды.

    --------------------------------

<*> Наименование тест-культуры и подготовка ее для
использования в методике определения колифагов указаны в соответствующих
разделах МУК 4.2.1018-01 "Санитарно-микробиологический анализ питьевой
воды".

 

6. Для контроля использовать измерительные ячейки со 100 мл
стерильной воды + 10 мл концентрированной среды BiMedia 001A + ночная культура
чувствительного к фагу штамма Е.coli (1 мл, 0,1 мл, 0,01 мл).

7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (START
MEASUREMENT) и начать измерение.

8. После того, как каждая позиция блока будет отмаркирована как
свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Бак
Трак".

Измерение начнется автоматически через 1 час после загрузки ячеек
в прибор.

9. Оценка результатов:

- при отсутствии колифагов в воде время детекции импеданса (IDT)
будет одинаковым как для исследуемого, так и для контрольного образца (при
сравнении одинакового количества внесенной культуры Е.coli);

- при наличии колифагов в воде время детекции импеданса (IDT) для
исследуемых образцов будет больше по сравнению с контролем (при сравнении
одинакового количества внесенной культуры Е.coli). Изменится также форма кривой
импедансного сигнала.

Примечание. Использование различных количеств тест-культуры
Е.coli рекомендуется только для начального этапа отработки и нахождения
оптимальной плотности культуры. В дальнейших исследованиях возможно
использование лишь оптимального количества вносимой культуры. Рекомендуется не
превышать показатель 100 - 1000 клеток Е.coli в измерительной ячейке.

 

5. Основные этапы создания калибровочного файла

 

Для создания калибровочного файла необходимо исследовать не менее
50 проб воды централизованных систем питьевого водоснабжения параллельно двумя
методами: классическим и с помощью прибора "Бак Трак".

Для этого необходимо:

1. В основном меню программы "Бак Трак" MAIN MENU в
разделе "Задание пороговых значений" (THRESHOLDS) не указывать
пороговые значения (NONE).

2. Провести исследование проб воды с использованием прибора в
соответствии с требованиями данных указаний и параллельные исследования этих же
проб классическим методом по МУК 4.2.1018-01 "Санитарно-микробиологический
анализ питьевой воды".

3. Результаты классического метода исследования занести в
соответствующий файл данных программы "Бак Трак".

Для этого:

3.1. В основном меню программы "Бак Трак" выбрать
раздел "Работа с данными" (Data Functions).

3.2. В меню Data Functions выбрать соответствующие файлы
исследования проб воды в разделе "Выбор файлов" (Select files).

3.3. Внести в меню "Data Functions" в разделе
"Ввод численных значений" (Enter Values) результаты для
соответствующих исследованных проб воды.

4. После того, как будет получено не менее 50 результатов
исследования двумя параллельными методами - классическим и автоматическим с
помощью прибора "Бак Трак" - можно приступать к создани