Утверждаю

Главный государственный

санитарный врач

Российской Федерации,

Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

26 февраля 2002 года

 

Дата введения -

1 мая 2002 года

 

4.2.
МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ

И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

 

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ
МЕТОДА

ИЗМЕРЕНИЯ
ЭЛЕКТРИЧЕСКОГО СОПРОТИВЛЕНИЯ (ИМПЕДАНСА)

ДЛЯ
САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

ПИТЬЕВОЙ
ВОДЫ

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ
УКАЗАНИЯ

МУК
4.2.1111-02

 

1. Разработаны Федеральным центром госсанэпиднадзора Минздрава
России (Подунова Л.Г., Кривопалова Н.С., Сорокина Р.С.) при участии фирмы
"SY-LAB", Австрия (М. Шинкингер, Соколов Д.М.).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному
санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России (прот. N 12 от
14 февраля 2002 г.).

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом
Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской
Федерации 26 февраля 2002 г., введены в действие с 1 мая 2002 г.

4. С момента ввода данных Методических указаний считаются
утратившими силу "Методические рекомендации по проведению
бактериологических исследований питьевой воды с использованием
микробиологического экспресс-анализатора "Бак Трак 4100" N
01-19/82-23 от 22.05.96 и раздел 6 "Исследование питьевой воды"
Методических указаний МУК 4.2.590-96 "Бактериологические исследования с
использованием микробиологического экспресс-анализатора "Бак Трак
4100".

5. Введены впервые.

 

1. Область применения

 

1.1. Настоящие Методические указания предназначены для центров
государственного санитарно-эпидемиологического надзора, осуществляющих контроль
качества питьевой воды централизованных систем питьевого водоснабжения, а также
для лабораторий организаций, предприятий и иных хозяйственных субъектов,
обеспечивающих производственный контроль.

1.2. Методические указания устанавливают ускоренный метод
качественного и количественного определения индикаторных микроорганизмов в
питьевой воде в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.4.1074-01 "Питьевая
вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем
питьевого водоснабжения. Контроль качества".

1.3. Настоящие Методические указания разработаны для
осуществления объективного, достоверного и быстрого
санитарно-микробиологического анализа питьевой воды с целью контроля ее качества
и для обеспечения безопасности и безвредности воды в централизованных системах
питьевого водоснабжения.

 

2. Сущность метода

 

Методические указания содержат описание
санитарно-микробиологического исследования питьевой воды по показателям
качества СанПиН 2.1.4.1074-01 "Питьевая вода. Гигиенические требования к
качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль
качества" с использованием микробиологического экспресс-анализатора
"Бак Трак 4100" <*> производства австрийской фирмы
"SY-LAB".

    --------------------------------

<*> Далее - "Бак Трак".

 

Предлагаемый анализатор является автоматизированной системой,
созданной на основе импедансной технологии и предназначенной для ускоренной
количественной и качественной оценки степени микробного загрязнения исследуемой
пробы.

Импеданс - это сопротивление потоку переменного тока через
проводящий материал. Импедансная технология в микробиологии является непрямым
культуральным методом для определения микроорганизмов с использованием
измерения электрического сопротивления. Изменения импеданса происходят в
питательной среде по мере того, как ее химический состав преобразуется в
результате роста и метаболической активности микроорганизмов. Под действием
микроорганизмов заряженные конечные продукты метаболизма выделяются в ростовую
среду.

    В основном  
незаряженные   или   слабозаряженные    субстраты

превращаются   в  
сильнозаряженные   конечные   продукты:  
белки

утилизируются до
аминокислот,  углеводы и жиры -  до 
органических

кислот  и 
т.д.  Образующиеся  метаболиты 
имеют меньший размер и,

таким образом,  более 
подвижны.  Эти  электрохимические  процессы

приводят  к 
существенным  изменениям
импеданса.  Когда количество

                                             6       7

микроорганизмов  достигает 
порога  около  10  
-  10   клеток/мл,

наблюдаются   экспоненциальные   изменения 
импедансного  сигнала.

Время,  необходимое для достижения значимого
изменения  импеданса,

называется  временем 
определения  импеданса  (IDT). 
Значение IDT

обратно пропорционально
начальной концентрации 
микроорганизмов  в

исследуемой пробе. Ход
кривых импедансного сигнала соответствует и

отражает кривую роста
микроорганизмов в исследуемой пробе.

Селективные питательные среды, специально разработанные для измерения
импеданса в системе "Бак Трак 4100", позволяют определять
микробиологические показатели качества питьевой воды в соответствии с
требованиями СанПиН 2.1.4.1074-01 и сокращают сроки получения результатов.

 

3. Нормативные ссылки

 

3.1. Федеральный закон "О санитарно-эпидемиологическом
благополучии населения" от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ.

3.2. "Основы законодательства Российской Федерации об охране
здоровья граждан" от 22.07.93 N 5487-1.

3.3. Санитарные правила и нормы "Питьевая вода.
Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого
водоснабжения. Контроль качества". СанПиН 2.1.4.1074-01.

3.4. Методические указания "Санитарно-микробиологический
анализ питьевой воды". МУК 4.2.1018-01.

3.5. Методические указания "Бактериологические исследования
с использованием микробиологического экспресс-анализатора "Бак Трак
4100". МУК 4.2.590-96.

 

4. Проведение анализа

 

Исследование проводится по микробиологическим показателям
качества питьевой воды, регламентированным СанПиН 2.1.4.1074-01 "Питьевая
вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем
питьевого водоснабжения. Контроль качества".

Определяемые показатели:

1. Общее число микроорганизмов в 1 мл.

2. Общие колиформные бактерии в 100 мл.

3. Термотолерантные колиформные бактерии в 100 мл.

4. Споры сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл.

5. Колифаги в 100 мл.

Отбор, хранение и транспортирование проб для исследования, а
также подготовка их к анализу и методика работы при использовании мембранных
фильтров проводятся в соответствии с требованиями МУК 4.2.1018-01
"Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды".

 

4.1. Определение общего числа микроорганизмов

 

1. Питательная среда: BiMedia 001A, приготовленная в соответствии
с требованиями инструкции изготовителя.

2. Протокол измерения.

2.1. Установить температуру 37 °C на приборе "Бак
Трак".

2.2. Установить в основном меню программы прибора параметры.

Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters):

Время исследования (Duration) - 24 ч.

Масштаб измерений (Scale):

- М-параметр 0 - 50%;

- Е-параметр 0 - 50%.

Время задержки (Delay) - 1 ч.

3. Установка пороговых значений (Thresholds):

3.1. В случае использования калибровочного файла для исследования
питьевой воды параметры пороговых значений вносятся автоматически (имеется
коммерческий калибровочный файл для исследования питьевой воды - WATER.COR).

3.2. При отсутствии калибровочного файла одновременно с посевом
исследуемого образца воды на среду BiMedia 001A производится определение общего
количества бактерий классическим методом на чашках Петри в соответствии с
требованиями МУК 4.2.1018-01 "Санитарно-микробиологический анализ питьевой
воды".

Наименования рекомендуемых для использования в данном случае
питательных сред приведены в разделе 6 данных Методических указаний.

Результаты, полученные при классическом методе исследования
(KOE/CFU в 1 мл), вносят в соответствующий файл (MAIN MENU/DATA FUNCTION/ENTER
VALUES). Основные этапы создания калибровочного файла рассмотрены в разделе 5
данных указаний.

4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды BiMedia
001A.

5. Внести 1 мл исследуемого образца воды в измерительную ячейку с
9 мл питательной среды.

6. Тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями
(не переворачивать ячейку!).

7. Для контроля среды используют одну измерительную ячейку с 10
мл среды BiMedia 001A (без инокулята).

8. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (START
MEASUREMENT) и начать измерение.

9. После того, как каждая позиция блока будет отмаркирована как
свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Бак
Трак".

Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в
прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT)
будут записаны автоматически.

При пересечении порогового значения происходит автоматический
подсчет численности микроорганизмов в исследуемом образце воды.

Результат определения KOE (CFU) выдается автоматически в виде
количества микроорганизмов в 1 мл исследуемого образца воды.

Учет результатов проводится по М-параметру.

 

4.2. Определение общих и термотолерантных

колиформных бактерий

 

Исследование может проводиться одним из трех методов:

1) мембранной фильтрации с последующим тестированием на
микробиологическом экспресс-анализаторе "Бак Трак";

2) титрационным с предварительным этапом накопления бактерий в
жидкой питательной среде;

3) прямого измерения с использованием измерительных ячеек прибора
"Бак Трак" объемом 100 мл.

 

4.2.1. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий
методом мембранной фильтрации (основной метод)

 

Сущность метода заключается в концентрировании бактерий из
установленного объема анализируемой пробы воды и дальнейшем определении
показателя на приборе "Бак Трак". Используется метод мембранных
фильтров в соответствии с МУК 4.2.1018-01 "Санитарно-микробиологический
анализ питьевой воды".

1. Среда BiMedia 160B <*>, приготовленная в соответствии с
требованиями инструкции изготовителя.

    --------------------------------

<*> Возможно использование питательной среды BiMedia 160C
при необходимости определения индолообразования.

 

2. Протокол измерения.

2.1. Установить температуру 37 °C на приборе "Бак
Трак".

2.2. Установить в основном меню программы прибора параметры.

Время исследования (Duration) - 24 ч.

Масштаб измерений (Scale):

- М-параметр 0 - 50%;

- Е-параметр 0 - 50%.

Время задержки (Delay) - 1 ч.

3. Установка пороговых значений (Thresholds):

3.1. В случае использования калибровочного файла для исследования
питьевой воды параметры пороговых значений вносятся автоматически (имеется
коммерческий калибровочный файл для исследования питьевой воды на колиформные
бактерии - COLI.COR).

3.2. В отсутствии калибровочного файла одновременно с посевом
исследуемого образца воды на среду BiMedia 160B производится определение наличия
колиформных бактерий классическим методом мембранных фильтров в соответствии с
МУК 4.2.1018-01.

Результаты, полученные при классическом методе исследования,
вносят в соответствующий файл (MAIN MENU/DATA FUNCTION/ENTER VALUES). Основные
этапы создания калибровочного файла рассмотрены в разделе 5 данных указаний.

4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 10 мл среды BiMedia
160B.

5. Поместить мембранный фильтр исследуемого образца воды в
измерительную ячейку с 10 мл среды.

6. Для контроля среды используют измерительную ячейку с 10 мл
среды BiMedia 160B.

7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (START
MEASUREMENT) и начать измерение.

8. После того, как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как
свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Бак
Трак".

Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в
прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT)
будут записаны автоматически.

При наличии в исследуемом образце воды единичных клеток
колиформных бактерий изменение сигнала импеданса превышает 5%-ное пороговое
значение по М-параметру за период времени менее 16 часов.

При положительном результате наблюдается также изменение цвета
питательной среды: исходный пурпурный цвет среды меняется на желтый.

При использовании калибровочного файла результат исследования
выдается автоматически в виде количества колиформных бактерий в исследуемом
объеме воды.

Для постановки оксидазного теста и определения ферментации
лактозы при (44 +/- 0,5) °C с целью подтверждения наличия или отсутствия
термотолерантных колиформных бактерий в исследуемой пробе из ячеек с признаками
роста колиформных бактерий делают высев петлей на чашки Петри со средой Эндо.
Посевы инкубируют