width=81 valign=top>
 


 




Фталаты           
(пластификаторы)  


0,5    


3   


+  


+


 


 




Изопропанол       


0,25   


4   


+  


+


 


 




Ацетон            


2,2    


3   


+  


+


 


 




Толуол            


0,5    


4   


+  


+


+  


 




Бензол            


0,5    


2   


+  


+


+  


 




Ксилол            


0,05   


3   


+  


+


+  


 




Бор               


0,5    


 


 


 


 


+ 




 

 

 

 

 

 

Приложение 7

(обязательное)

 

МЕТОД

ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЩЕГО ЧИСЛА МИКРООРГАНИЗМОВ,
ОБРАЗУЮЩИХ

КОЛОНИИ НА ПИТАТЕЛЬНОМ АГАРЕ (ОМЧ)

 

Оборудование, расходные материалы, питательные среды, метод
посева и учет результатов - в соответствии с МУК 4.2.1018-01
"Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды".

При определении показателя ОМЧ при 37 °C делают посев по 1 мл в
две чашки Петри. При необходимости определения двух показателей ОМЧ при 37 °C и
при 22 °C посев по 1 мл производят в четыре чашки Петри (по две чашки Петри на
каждую температуру). Посевы производят при горящей спиртовке.

Приоткрыв крышку чашки Петри, посев заливают небольшим
количеством (8 - 10 мл) питательного агара, охлажденного до температуры 45 - 46
°C. Заливку питательного агара производят после фламбирования краев емкости.
Посев немедленно смешивают с питательным агаром плавными вращательными
движениями, избегая попадания на края и крышку чашки Петри, и оставляют на
ровной горизонтальной поверхности. Время между внесением пробы и агара не
должно превышать 10 - 15 минут.

После полного застывания чашки переворачивают крышкой вниз и две
инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 2) часа, и две -
инкубируют при температуре (22 +/- 1) °C в течение (68 +/- 4) часа.

При учете результатов подсчитывают все колонии на двух параллельных
чашках, видимые при увеличении в два раза, и вычисляют среднее арифметическое.
Результат выражают числом колоний в 1 мл пробы воды и выдают ответ - число КОЕ
ОМЧ в 1 мл при 37 °C и при 22 °C.

 

 

 

 

 

 

Приложение 8

(обязательное)

 

УСКОРЕННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЩИХ

И ГЛЮКОЗОПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИЙ

 

Обнаружение ОКБ в расфасованной воде выполняют методом мембранной
фильтрации или титрационным по МУК 4.2.1018-01.

При необходимости получения быстрого ответа о качестве воды, при
производственном контроле определение ОКБ и ГКБ проводят ускоренным методом.

 

Определение общих колиформных бактерий

методом мембранной фильтрации

 

Принцип метода заключается в использовании на этапе идентификации
комбинации двух признаков ОКБ: первый (основной) - характер роста колоний на
лактозной среде Эндо - темно-красные с отпечатком на обратной стороне фильтра,
что подтверждает способность ферментировать лактозу до кислоты; второй -
отрицательный оксидазный тест или способность к газообразованию. Поскольку
лактозоположительные бактерии, ферментирующие лактозу до кислоты и газа,
аналогично ферментируют глюкозу, то газообразование можно подтвердить на средах
с любым углеводом, однако использование подтверждающих сред с глюкозой
целесообразнее, т.к. сокращает время анализа на сутки.

Выполнение анализа

Подготовка посуды, питательных сред и реактивов, техника
мембранной фильтрации выполняется по МУК 4.2.1018-01.

Объем пробы воды 300 мл профильтровывают через мембранные
фильтры, помещают на среду Эндо. Чашки с посевами ставят в термостат дном вверх
и инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 +/- 2 часа.

Если после инкубации на фильтрах нет роста или выросли колонии,
не характерные для колиформных бактерий - плесневые, морщинистые, пленчатые,
губчатые, расплывчатые, прозрачные, - выдают отрицательный ответ.

Если на фильтрах обнаружен рост типичных для лактозоположительных
бактерий колоний (выявляются благодаря дифференциальным свойствам лактозной
среды Эндо) - темно-красных, красных с металлическим блеском или без него,
слизистых розовых с отпечатком на обратной стороне фильтра - следует
подтвердить их принадлежность к ОКБ. Для этой цели можно использовать один из
вариантов.

Первый вариант

Выполняют оксидазный тест любым из методов (наложением мембранных
фильтров на диск фильтровальной бумаги, смоченной реактивом, нанесением штрихом
культуры на полоску фильтровальной бумаги, смоченной реактивом, накапыванием
реактива на колонию и другими). При изменении цвета всех колоний
(оксидазоположительные) дают отрицательный ответ.

Не изменившие цвета после контакта с реактивом типичные колонии
подсчитывают и относят к группе ОКБ.

Второй вариант

Подсчитывают число типичных колоний каждого типа и подтверждают
их способность образовывать кислоту и газ путем посева на полужидкую среду с
глюкозой. Исследуют не менее 2 - 3 колоний каждого типа. Посевы инкубируют при
температуре 37 °C. Просмотр реакции проводят через 4 - 6 часов и при наличии
кислоты и газа дают положительный ответ. Пробирки, где образовалась только
кислота или среда не изменилась, оставляют для окончательного учета через 24
часа.

К группе ОКБ относят бактерии, образующие типичные колонии на
среде Эндо и кислоту и газ при ферментации глюкозы.

Допускается использование любых тест-систем для установления
способности газообразования при ферментации углевода, имеющие сертификат
качества.

Примечание. При производственном контроле наличие ОКБ служит
основанием к приостановке выдачи сертификата качества на данную партию
продукции. Дальнейшую идентификацию выросших розовых колоний можно не
продолжать.

 

Определение глюкозоположительных колиформных
бактерий

методом мембранной фильтрации

 

В индикаторную группу ГКБ входят помимо ОКБ еще и
лактозоотрицательные бактерии семейства Enterobacteriaceae,
оксидазоотрицательные, растущие на среде Эндо в виде разного типа розовых
колоний, ферментирующие глюкозу до кислоты и газа при температуре (37 +/- 1)
°C.

Принцип метода определения ГКБ заключается в подтверждении
наличия бактерий, ферментирующих глюкозу до кислоты и газа в том же посеве, что
и для определения ОКБ. При обнаружении типичных и розовых (или только розовых)
колоний подсчитывают ОКБ, а затем продолжают идентификацию розовых колоний по
оксидазному тесту и способности образования кислоты и газа на подтверждающих
средах с глюкозой.

Выполнение анализа

Если на фильтрах помимо типичных выросли колонии, характерные для
лактозоотрицательных бактерий семейства Enterobacteriaceae, - розовые, розовые
с красным центром, бледно-розовые, белесые (или только лактозоотрицательные),
выполняют оксидазный тест путем помещения мембранного фильтра на кружок
фильтровальной бумаги, обильно смоченный реактивом для оксидазного теста. При
признаках проявления реакции, но не позднее чем 5 минут, фильтр переносят
обратно на среду Эндо и учитывают результат после четкого проявления реакции.

Если все колонии изменили цвет (оксидазоположительные), дают
отрицательный ответ.

При наличии колоний, не изменивших цвет (оксидазоотрицательных),
подсчитывают число таких колоний каждого типа и производят пересев в полужидкие
среды с глюкозой. Исследуют не менее 2 - 3 колоний каждого типа. Инкубируют
посевы при 37 °C в течение 4 - 24 часов. В качестве ОКБ подсчитывают типичные
колонии. В качестве ГКБ подсчитывают в сумме колонии как типичные, так и
розовые, которые способны образовывать кислоту и газ при ферментации глюкозы.

 

Учет результатов анализа при определении общих

и глюкозоположительных колиформных бактерий

 

При отсутствии роста на мембранных фильтрах или при отрицательном
ответе в подтверждающих тестах в протоколе анализа указывают: ОКБ и ГКБ не
обнаружены в 300 мл.

При росте на фильтрах типичных колоний лактозоположительных
бактерий и подтверждении их принадлежности к группе ОКБ (либо с отрицательным
оксидазным тестом, либо ферментирующих глюкозу до кислоты и газа) их число
суммируют, сумму делят на три и в протоколе анализа указывают: число КОЕ
ОКБ/100 мл; и число КОЕ ГКБ/100 мл. В данном случае результаты по ОКБ и ГКБ -
одинаковые, поскольку ОКБ ферментируют как лактозу, так и глюкозу до кислоты и
газа.

При росте на фильтрах помимо типичных еще и розовых колоний
оксидазоотрицательных бактерий, а также только розовых подсчитывают число
колоний, ферментирующих глюкозу до кислоты и газа при температуре 37 °C, затем
суммируют с числом ОКБ, делят на три. В протоколе анализа указывают результат:
число КОЕ ГКБ/100 мл.

Обнаружение оксидазоположительных колоний служит показанием к
проведению анализа на обнаружение Ps. aeruginosa.

 

Определение общих и глюкозоположительных
колиформных

бактерий титрационным методом

 

Ускорение анализа достигают использованием на первом этапе
анализа в качестве среды накопления глюкозопептонной среды. Этот прием
позволяет в одном посеве определять ОКБ и ГКБ, что возможно благодаря
способности ОКБ ферментировать как лактозу, так и глюкозу как основной биохимический
признак семейства Enterobacteriaceae. Кроме того, накопление колиформных
бактерий в среде с глюкозой происходит более интенсивно за счет быстрого
разложения глюкозы по сравнению с лактозой, что сокращает время анализа на
сутки.

Выполнение анализа

Глюкозопептонную среду готовят так же, как лактозопептонную,
заменив углеводлактозу на глюкозу МУК 4.2.1018-01.

Исследуемый объем воды 300 мл засевают в три емкости с 10 мл
концентрированной глюкозопептонной среды по 100 мл в каждую емкость. Посевы
инкубируют при температуре (37 +/- 1 ) °C в течение 24 часов.

Отсутствие изменения среды позволяет дать отрицательный ответ.

Из посевов в среду накопления, где отмечено помутнение и
газообразование или только помутнение, производят высев на сектора среды Эндо с
таким расчетом, чтобы получить изолированные колонии. Посевы на среде Эндо
инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 16 - 18 часов.

При обнаружении роста на секторах, характерных для колиформных
бактерий колоний, выполняют оксидазный тест одним из способов (нанесением
штрихом колонии каждого типа на полоску фильтровальной бумаги, смоченной
реактивом; нанесением капли реактива на часть сектора).

Отрицательный ответ дают в следующих случаях:

- в среде накопления нет признаков роста;

- на секторах среды Эндо нет роста;

- на секторах среды Эндо выросли не характерные для колиформных
бактерий колонии (прозрачные, с неровными краями, расплывчатые);

- все колонии на секторе оказались оксидазоположительные.

В протоколе анализа сообщают: отсутствие ОКБ в 300 мл и
отсутствие ГКБ в 300 мл.

При обнаружении на секторах роста типичных оксидазоотрицательных
колоний - темно-красных, красных, с металлическим блеском или без него - дают
ответ о наличии ОКБ и ГКБ в пробе воды. В протоколе анализа сообщают:
обнаружение ОКБ в 300 мл, обнаружение ГКБ в 300 мл.

Если на секторах не выявлен рост типичных колоний, а обнаружены
розовые оксидазоотрицательные колонии и при этом в среде накопления установлено
газообразование - дают ответ о наличии ГКБ. В протоколе анализа сообщают:
обнаружение ГКБ в 300 мл.

Данный анализ является качественным. При необходимости получения
количественного результата производят посев в глюкозопептонную среду трех
объемов по