Утверждаю

Главный государственный

санитарный врач Российской

Федерации - Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

22 марта 2000 года

 

Дата введения -

1 июня 2000 года

 

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ

И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ
ФАКТОРЫ

 

САНИТАРНО -
ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ

ХОЗЯЙСТВЕННОГО И
ПИТЬЕВОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МУК 4.2.964-00

 

1.
Подготовлены коллективом авторов: Г.И. Новосильцев (к.м.н.), Н.А. Романенко
(д.м.н., академик РАЕН), В.А. Рябченко (к.б.н.), Г.С. Горяинова, Т.А. Семенова
(к.б.н.), М.Е. Батаева (к.м.н.), Ю.А. Рахманин (д.м.н., академик РАМН), Р.Э.
Михайлова (д.м.н.) - ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского Минздрава России, НИИКВОВ
АКХ им. К.Д. Памфилова, НИИЭЧиГОС им. А.Н. Сысина РАМН. Использованы материалы,
разработанные Н.А. Русановой (к.м.н.), Г.Л. Медришем (к.т.н.) - НИИКВОВ АКХ им.
К.Д. Памфилова.

2.
Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом
Российской Федерации 22 марта 2000 г.

3. С
введением настоящих Методических указаний утрачивают силу МУК 4.2.668-97
"Санитарно - паразитологическое исследование воды" и раздел
"Контроль качества питьевой воды по паразитологическому показателю
(содержание цист лямблий)", пункты 4, 5, 6 Информационно - методического
письма "О дополнительных мерах по осуществлению контроля качества питьевой
воды по микробиологическим и паразитологическим показателям" от 24 июля
1998 г. N 1100/1670-98-11.

 

1. Назначение и область применения

 

1.1.
Настоящие Методические указания устанавливают метод лабораторного исследования
качества воды хозяйственно - питьевого и культурно - бытового водопользования
по паразитологическим показателям безопасности для здоровья человека,
проводимого в порядке государственного санитарно - эпидемиологического надзора.

1.2.
Методические указания предназначены для применения в лабораториях учреждений,
осуществляющих государственный санитарно - эпидемиологический надзор, а также
ведомственный лабораторный контроль качества окружающей среды на соответствие:

-
СанПиН 2.1.4.559-96 "Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству
воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества";

-
СанПиН 2.1.2.568-96 "Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и
качеству воды плавательных бассейнов";

-
СанПиН 3.2.563-96 "Профилактика паразитарных болезней на территории
Российской Федерации";

-
действующим санитарным правилам по охране поверхностных вод от загрязнения.

 

2. Методика санитарно - паразитологического

исследования воды хозяйственного

и питьевого использования

 

Методика
предназначена для обнаружения в воде цист патогенных простейших кишечника
(лямблий, амебы дизентерийной, балантидия) и яиц гельминтов, представляющих
непосредственную угрозу для здоровья человека при их заглатывании, при
осуществлении контроля качества воды по паразитологическим показателям в
источниках хозяйственно - питьевого водоснабжения (поверхностных водоемах,
ручьях, каптажах, колодцах, артезианских скважинах), в распределительной сети
систем централизованного хозяйственно - питьевого водоснабжения, а также в
водоемах рекреационного назначения <*>.

    --------------------------------

<*>
Настоящая Методика не предназначена для индикации в воде ооцист криптоспоридий,
т.к. для их определения требуются более сложная подготовка диагностического
материала и использование дорогостоящих специальных тест - систем, не выпускаемых
в настоящее время отечественными производителями.

 

2.1. Принцип методики

 

Цисты
патогенных простейших кишечника и яйца гельминтов обнаруживаются при
микроскопическом исследовании осадка, получаемого после центрифугирования не
менее 4-кратно разведенного раствора флотанта с плотностью 1,26, в который
искомые паразитарные агенты попадают из осадка, смываемого с мембранных
фильтров после фильтрации через них исследуемой воды. Осаждение цист простейших
и яиц гельминтов происходит за счет резкого снижения плотности флотанта,
которая после разведения достигает 1,03 и менее, что ниже плотности
паразитарных агентов. Плотность их приводится в разделе 7.

 

2.2. Чувствительность метода

 

Метод
обладает чувствительностью с пределом обнаружения, равным единичным цистам
лямблий на 1 л. Эффективность выделения цист лямблий данным методом зависит от
исходной концентрации паразитарных патогенов в пробе, объема пробы, мутности,
обилия фитопланктона и квалификации исполнителя.

 

3. Оборудование и материалы

 

3.1. Оборудование

 

3.1.1.
Устройство для вакуумной фильтрации через мембранные фильтры: стационарное
устройство, используемое для бактериологических и химических исследований в
лабораториях водоочистных станций и центров госсанэпиднадзора: фильтровальный
аппарат АФ или "Прибор вакуумного фильтрования" ПВФ-142/ЭМ. При
отсутствии указанных стационарных установок может быть использован аппарат
Гольдмана, состоящий из воронки Гольдмана, колбы для фильтрования под вакуумом
номинальной вместимостью 2000 - 5000 мл (ГОСТ 6514-63), водоструйного насоса
(ГОСТ 10696-75) или насоса Комовского, а в полевых условиях - ручного
велосипедного насоса или других установок, прошедших гигиеническую оценку и
имеющих гигиеническое заключение.

3.1.2.
Мембранные фильтры с порами размером 3 - 5 мк и диаметром мембранного диска,
соответствующим размерам фильтровальной ячейки фильтрующего устройства, - от 35
+/- 2 мм и более. В качестве мембранных фильтров могут быть применены
фильтрующие мембраны "Владипор" марки МФАС-СПА ТУ 6-55-221-15-18-98
(предназначены для использования в приборе ПВФ-142/ЭМ), "Миллипор",
"Прагопор", "Сарториус" или другие с аналогичными
свойствами, прошедшие гигиеническую оценку и имеющие гигиеническое заключение.

3.1.3.
Лабораторная центрифуга типа ОПН-3, ОПН-8, ЦЛС-31М со сменным ротором или
другие с аналогичными параметрами, обеспечивающие 1500 - 2500 об/мин. (600 -
650 g), позволяющие центрифугировать пробы воды в центрифужных пробирках
объемом 10 - 250 мл.

3.1.4.
Холодильник электрический или газовый, поддерживающий температуру 4 - 6 град.
C.

3.1.5.
Термостат электрический типа ТС-80 или аналогичный с автоматическим
терморегулятором и термометром с ценой деления 0,2 град. C.

3.1.6.
Микроскоп биологический (типа МБИ, "Биолам" и др.), снабженный
бинокулярной насадкой (АУ-12 и др.), препаратоводителем (типа СТ-12 и др.),
имеющий объективы 10, 20, 40 и объектив 90 - 100x масляной иммерсии, а также
желательно объектив 40 - 65x водной иммерсии, обеспечивающий увеличение от 100
до 1000 крат, имеющий объектив и укомплектованный окуляр - микрометром и объект
- микрометром для калибровки первого, а также имеющий оптику фазового
контраста, расширяющую возможности дифференциации цист от фитопланктона.

3.1.7.
Осветитель ОИ-19 для микроскопа или другой аналогичный с мощностью лампы не
менее 50 ватт.

3.1.8.
Весы лабораторные для взвешивания в диапазоне 50 мг - 200 г равноплечные ручные
(аптекарские) с разновесами, ВЛР-200 и др.

3.1.9.
Денсиметры (ареометры) типа 1 (А1) с пределами измерения от 1,000 до 1,400
кг/куб. м ГОСТ 1300-74.

3.1.10.
Дозаторы пипеточные П1-0,1, П1-0,5, П1-1,0 мл ТУ 64-339-81 или аналогичные.

3.1.11.
Пинцет анатомический.

3.1.12.
Кисти мягкие из волоса белки, колонка или соболя для живописи N 12 - 18.

3.1.13.
Стаканы стеклянные высокие с носиком (ВН) номинальной вместимостью 50 - 100 мл
ГОСТ 10394-63.

3.1.14.
Пробирки центрифужные градуированные (ПЦГ) емкостью 10 мл ГОСТ 1770-64.

3.1.15.
Стекла предметные 25 x 75 мм.

3.1.16.
Стекла покровные 18 x 18, 24 x 24 мм ГОСТ 6672-59.

3.1.17.
Чашки биологические (Петри) ГОСТ 25336-82.

3.1.18.
Часы песочные на 3 - 5 мин. или часы сигнальные.

3.1.19.
Штативы лабораторные для пробирок ТУ 64-1-707-80.

3.1.20.
Емкости для отбора проб воды из нейтрального материала, пригодные для
обеззараживания принятыми методами: канистры пластмассовые емкостью 5 - 10 - 20
- 25 л, стеклянные бутыли, фляги молочные металлические емкостью 30 - 35 л,
эмалированные бидоны.

3.1.21.
Цилиндры измерительные с носиком 1 - 100, 1 - 250, 1 - 500 ГОСТ 1770-74.

3.1.22.
Колба 2-50-2, 2-100-2, 1-1000 ГОСТ 1770-74.

3.1.23.
Капельница для многократной дозировки по Манну ГОСТ 9876-61.

3.1.24.
Широкогорлые стеклянные или пластиковые флаконы емкостью 100 - 500 мл с
притертыми или завинчивающимися крышками.

3.1.25.
Спиртовка.

3.1.26.
Иглы препаровальные.

3.1.27.
Ножницы с прямыми браншами.

 

3.2. Реактивы

 

3.2.1.
Формальдегид 40%-ный (продажный).

3.2.2.
Сульфат цинка семиводный (ZnSO4 x 7H2O) х.ч.

3.2.3.
Сахароза ч.д.а.

3.2.4.
Сульфат магния (MgSO4) ч.д.а.

3.2.5.
Тиосульфат натрия ГОСТ 244-76.

3.2.6.
Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72.

3.2.7.
Натрий хлористый х.ч. ГОСТ 4233-77.

3.2.8.
Йод кристаллический х.ч.

3.2.9.
Калий йодистый (KI) х.ч.

3.2.10.
Эозин сухой х.ч.

3.2.11.
Метиленовый синий сухой х.ч.

3.2.12.
Кислота хлористоводородная (HCl) 30% х.ч.

3.2.13.
Сульфат аммония [(NH4)2SO4] х.ч.

3.2.14.
Сульфат железа [Fe2(SO4)3] х.ч.

3.2.15.
Сульфат меди (CuSO4) х.ч.

3.2.16.
Панкреатин сухой.

3.2.17.
Сода двууглекислая (Na2CO3).

 

3.3. Приготовление рабочих растворов реактивов

 

3.3.1.
Флотанты - любой из трех ниже названных:

-
33%-ный водный раствор семиводного сульфата цинка: 331 г семиводного сульфата
цинка растворяют в 1 куб. дм кипящей дистиллированной воды;

-
30%-ный водный раствор сахарозы: 300 г сахарозы ч.д.а. растворяют в 1 куб. дм
горячей (70 - 80 град. C) дистиллированной воды;

-
раствор, состоящий из смеси насыщенных растворов сульфата магния (250 г соли
растворяют в 1 л воды при температуре 80 град. C), тиосульфата натрия (300 г
соли растворяют в 1 л кипящей воды) и дистиллированной воды, соотношение
компонентов 3:3:1.

После
приготовления флотанта и снижения его температуры до 18 град. C контролируют
его удельную плотность ареометром. Для выделения цист простейших и яиц
гельминтов, представляющих непосредственную опасность заражения человека при
заглатывании с водой, удельная плотность флотанта должна быть 1,25 - 1,26. Если
величина этого показателя ниже, ее нужно откорректировать, добавляя более
концентрированные растворы соответствующих веществ.

3.3.2.
3%-ный раствор Люголя: 1,5 г йода кристаллического и 3 г калия йодистого
растворяют в 100 мл дистиллированной воды (первым растворяют калий йодистый),
выдерживают в темноте при 37 град. C в течение 3 суток, после чего используют в
работе.

3.3.3.
2%-ный водный раствор формалина: 1 часть 40%-ного формальдегида растворяют в 20
частях дистиллированной воды.

3.3.4.
Жидкость Барбагалло: 3%-ный формалин на физиологическом растворе (0,85% хлорида
натрия).

3.3.5.
1%-ный водный раствор эозина.

3.3.6.
Раствор, состоящий из 1 части метиленового синего и 50000 частей
дистиллированной воды, готовят путем последовательных разведений.

3.3.7.Смесь
(искусственный дуоденальный сок), состоящая из 0,5 г панкреатина, 0,9 г
двууглекислой соды и 5 мл дистиллированной воды.

3.3.8.
Раствор хлористоводородной кислоты 1%-ный.

 

4. Отбор и хранение проб

 

Отбор
проб питьевой воды и воды плавательных бассейнов по количеству и кратности
проводят в соответствии с СанПиН 2.1.4.559-96 "Питьевая вода.
Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого
водоснабжения. Контроль качества" и СанПиН 2.1.2.568-96 "Гигиенические
требования к устройству, эксплуатации и качеству воды плавательных
бассейнов".

Контроль
воды подземных водоисточников по паразитологическим показателям может быть
рекомендован при условии неоднократных неудовлетворительных микробиологических
результатов исследования.

Количество
проб и точек забора в распределительной сети утверждается по согласованию с
санитарно - эпидемиологической службой при разработке рабочей программы с
учетом численности водопотребителей.

Отбор
проб воды производится в чистые емкости. Сосуды больших объемов - молочные
фляги, металлические и пластмассовые ведра и т.п., которые тщательно
промываются кипяченой водой и ополаскиваются отбираемой для анализа водой.

Пробы
воды могут доставляться в лабораторию без обработки или, в целях облегчения их
транспортирования, после предварительной обработки (концентрирования материала
путем фильтрования на месте отбора проб, в лаборатории водопроводной станции и
др.).

С
этой же целью может быть использована методика первичной концентрации
паразитарных патогенов с помощью таких коагулянтов, как сульфат аммония,
сульфат железа, сульфат меди в дозе 0,1 - 0,3 г/л.

В
пробу воды на месте отбора добавляют коагулянт, затем тщательно перемешивают и
отстаивают 1 - 2 ч. После этого надосадочную жидкость удаляют, а осадок переносят
в сосуд объемом 1 л и доставляют в лабораторию. Содержимое сосуда вновь
отстаивают 1 - 2 ч, а осадок после удаления надосадочной жидкости переносят в
центрифужные пробирки 10 - 50 мл (в зависимости от объема осадка) и
центрифугируют в течение 5 мин. при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают,
а к осадку добавляют 3 мл 1%-ного раствора хлористоводородной кислоты для
растворения хлопьев коагулянта, перемешивают и центрифугируют в таком же
режиме. Надосадочную жидкость удаляют, а осадок обрабатывают по нижеопис