где

p - долевой показатель;

arcsin - определяется в
радианах.

Далее для двух
сравниваемых групп N 1 и 2 рассчитывают величину U-критерия по формуле:

 

                                ____________________

            U = |фи1 - фи2| x \/ N1 x N2 / (N1 + N2).

 

Различие по данному
показателю признается достоверным (нуль гипотеза отклоняется, P < 0,04),
если U >= 1,96.

Различие в тяжести
реакции анафилаксии между двумя группами в целом признается достоверным, если
достоверно различие хотя бы по одному, из двух вышеуказанных, показателю.

Достоверность различий
средних значений и дисперсий уровней антител к ОВА в двух группах определяют,
соответственно, с использованием T-теста Стьюдента и F-теста на остаточную
дисперсию Фишера. Анализу подвергают показатели оптической плотности (D492)
концентрации антител (мг/мл) и десятичного логарифма концентрации антител.

Все расчеты выполняют на
ЭВМ с использованием стандартного пакета программ EXCEL5.0a.

 

7.4.4.
Иммунологические исследования

 

7.4.4.1.
Исследования на крысах

 

Исследования проводятся
по схеме хронического эксперимента при тех же условиях кормления и содержания.
Через 1 месяц и через 6 месяцев от начала эксперимента определяют следующие
показатели:

 




Изучаемые показатели                


Литературный
источник 




Показатели гумо-
рального иммуни-
тета           


Суммарный уровень иммуноглобули- 
нов и количество иммуноглобулинов
различных классов                 


107 - 109  




Показатели кле-
точного иммуни-
тета           


Реакция бласттрансформации лимфо-
цитов in vitro                   
Реакция торможения миграции      
лейкоцитов                       


110 - 111  




Неспецифические
факторы иммуни-
тета           


Система комплемента              
белки острой фазы                
лизоцим                          


107, 112   




 

7.4.4.2.
Исследования на мышах

 

Исследование
иммуномодулирующего действия продукта на гуморальное звено иммунитета

 

Изучение
иммуномодулирующего действия продукта на гуморальное звено иммунитета
оценивается в тесте определения уровня гемаглютининов к эритроцитам барана.
Испытываемый продукт скармливают мышам в течение 21 дня (опытная группа - 10
мышей). Контролем служат 2 группы мышей (20 мышей). Используются мыши 2-х
оппозитных линий: C57 BL/6 и CBA. После курса вскармливания опытной и одной
контрольной группе мышей вводят внутрибрюшинно 0,5 мл эритроцитов барана
(концентрация 20 млн клеток/мл), вторая контрольная группа остается интактной.
Кровопускание проводится на 7, 14 и 21 день. Сыворотку крови титруют в реакции
гемагглютинации общепринятым методом [113]. Подсчитывают среднюю арифметическую
титра гемагглютининов в каждой группе мышей.

 

Изучение
иммуномодулирующего действия продукта на клеточное звено иммунитета

 

Изучение
иммуномодулирующего действия продукта на клеточное звено иммунитета определяют
в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к эритроцитам барана.
Используются мыши двух оппозитных линий. Испытываемый продукт скармливают мышам
в течение 21 дня (опытная группа мышей - 10). После курса скармливания опытной
и одной контрольной группе вводят подкожно в межлопаточную область эритроциты
барана в дозе 1 млн. клеток на мышь в объеме 0,1 мл. Вторая контрольная группа
остается интактной. На пятый день всем мышам в подушечку одной задней лапы
вводят разрешающую дозу эритроцитов барана в концентрации 1 млрд. клеток на
мышь в объеме 0,02 мл. В контрлатеральную подушечку лапы в том же объеме -
0,95-процентный раствор натрия хлорида. Местную воспалительную реакцию
оценивают через 18 - 20 часов путем определения веса опытной и контрольной
лапок. Интенсивность местной реакции определяют по индексу реакции [114].

 

Изучение продукта как
сенсибилизирующего агента к продуктам метаболизма организма

 

Изучение продукта как
сенсибилизирующего агента к продуктам метаболизма организма изучают в тесте
чувствительности мышей к гистамину [115].

Используются мыши линии
C57 BL/6. Испытываемый продукт скармливают опытной группе (10 мышей) в течение
21 дня. Контрольная группа - 10 мышей. После курса скармливания опытной и
контрольной группам мышей вводят внутрибрюшинно гистамин гидрохлорид в дозе 2,5
мг на мышь в объеме 0,5 мл физиологического раствора. Реакцию учитывают через 24
ч по % гибели мышей.

 

Изучение влияния продукта
на естественную резистентность мышей к сальмонеллам мышиного тифа

 

Изучение влияния продукта
на естественную резистентность мышей к сальмонеллам мышиного тифа проводят на
модели внутрибрюшинного заражения мышей линии C57 BL/6 десятикратно
отличающимися дозами S.typhimurium штамм 415. Испытываемый продукт скармливают
мышам в течение 21 дня (опытная группа - 30 мышей). Контрольная группа - 30
мышей. После курса скармливания мышей заражают тремя дозами культуры: от 1000
до 10 микробных клеток на мышь (соблюдая 10-кратный интервал). Наблюдение за
животными производится в течение 14 дней. Подсчитывают ЛД50 в опытной и
контрольной группе, % гибели животных по каждой дозе и проводят сравнительный
анализ результатов.

 

7.4.5.
Определение биологической ценности

и
усвояемости

 

Биологическую ценность
белков определяют химическими и биологическими методами, а усвояемость - только
биологическим.

 

7.4.5.1.
Химический метод

 

В соответствии с
рекомендациями ФАО/ВОЗ [116] для определения биологической ценности белков
химическим методом используют метод расчета аминокислотного скора с коррекцией
на усвояемость, основанный на анализе и сопоставлении содержания незаменимых
аминокислот в исследуемых белках относительно их уровня в справочной
аминокислотной шкале с последующей коррекцией полученных величин на коэффициент
усвояемости.

Для изучения
аминокислотного состава белков проводят их гидролиз с последующим определением
содержания аминокислот на автоматических анализаторах. Для большей точности
определения рекомендовано [117] использовать пять типов гидролиза каждого
белка, в т.ч. три кислотных гидролиза, отличающихся лишь по продолжительности
(24, 48, 72 ч), специальный кислотный гидролиз с предварительным окислением
надмуравьиной кислотой для определения серосодержащих аминокислот в виде
цистеиновой кислоты и метионинсульфона и щелочной гидролиз для определения
триптофана. При этом для всех незаменимых аминокислот, исключая серосодержащие
и триптофан, строится кривая их содержания в зависимости от вышеуказанной
продолжительности кислотного гидролиза и по максимальному значению на ней
оценивают уровень аминокислоты.

 

Методы гидролиза белков

 

- высокобелковые
концентраты с продолжительностью гидролиза 24, 48, 72 ч [117];

- низкобелковые продукты,
содержащие углеводы и/или липиды, с продолжительностью гидролиза 24, 48, 72 ч
[117];

- для определения
серосодержащих аминокислот [117];

- для определения
триптофана [117].

 

Определение содержания
аминокислот

 

Определение содержания
свободных аминокислот осуществляют на автоматических анализаторах аминокислот в
пяти видах гидролиза каждого исследуемого белка в соответствии с инструкцией
для конкретного вида анализатора.

 

Расчет аминокислотного
скора

 

Аминокислотный скор (АС)
белков рассчитывают для каждой незаменимой аминокислоты путем соотношения ее
содержания в 100 г исследуемого белка к ее же содержанию в справочной
аминокислотной шкале [116].

 

             содержание незаменимой аминокислоты в г /

                     100 г исследуемого белка

        АС = --------------------------------------------.

             содержание этой же аминокислоты в справочной

                       аминокислотной шкале

 

Для расчета АС используют
справочную аминокислотную шкалу, предложенную экспертами ФАО/ВОЗ:

 




Аминокислота      


Содержание в справочной аминокислотной
шкале                




Валин                   



3,5                 




Изолейцин               



2,8                 




Лейцин                  



6,6                 




Лизин                    


5,8                 




Метионин + цистин       



2,5                 




Треонин                 



3,4                 




Триптофан               



1,1                 




Фенилаланин + тирозин   



6,3                 




 

За величину АС
исследуемого белка принимают наименьшее из полученных значений.

 

Расчет биологической
ценности

 

Биологическую ценность
белка определяют путем коррекции установленной величины АС на коэффициент
усвояемости (У) данного белка. Значения "У" в виде величин истинной
усвояемости для различных белков, полученных в исследованиях с участием
человека, составляют:

 




Продукт            


Коэффициент усвояемости белков




Яйцо                            


0,97           




Молоко, сыр, казеин             


0,95           




Мясо, мясопродукты, рыба        


0,94           




Кукуруза                        


0,85           




Рис                             


0,88           




Хлопчатник                      


0,90           




Подсолнечник                    


0,90           




Пшеничная мука грубого помола   


0,86           




Пшеничная мука рафинированная   


0,96           




Пшеничный глютен                


0,99           




Овсяная крупа                   


0,86           




Пшено                           


0,79           




Горох                            


0,88           




Арахис