позиции плотной питательной среды в
открытых чашках Петри.

Частицы, присутствующие в воздухе, со временем осаждаются на
поверхность агара. Время экспозиции составляет от 15 мин. до нескольких часов.
Однако длительная экспозиция приводит к высыханию поверхности питательной среды
и к ухудшению условий сохранения и культивирования бактерий.

Этот метод широко распространен, и его применение целесообразно в
сочетании с активным методом контроля микробной контаминации воздуха.

Открытые чашки Петри располагают в нескольких точках. Например,
при розливе препаратов - как можно ближе к наполняющим иглам и в точки
"наихудших условий". В асептических зонах класса A (100) и B (100)
при экспозиции чашек Петри с питательной средой в течение 30 мин. во время
работы допускается рост одной, редко двух колоний.

 




Преимущества        


Ограничения          




Простота
использования      


Отбор только
быстрооседающих боль-
ших частиц                       




Не требует процесса
посева  


Влияние температуры на
эффектив- 
ность сбора                      




Различные типы
питательной  
среды могут быть использованы
для проращивания плесени,   
грибов, всего спектра микро-
организмов или отдельного   
вида                        


Сильное влияние скорости и
направ-
ления воздушного потока по отноше-
нию к поверхности среды на резуль-
таты теста                       




Очень экономичен            


Неопределенность объема
отобранной
пробы                            




 

2. Методы отбора проб с поверхностей

 

Для контроля микробной контаминации рабочих поверхностей
используются следующие методы:

- смыв;

- контактная пластина.

Репрезентативной считается проба, снятая с поверхности площадью
от 24 до 30 кв. см.

Если накопленные результаты текущего мониторинга свидетельствуют
о постоянном присутствии определенной группы микроорганизмов, то для их
идентификации может быть использован соответствующий тип питательной среды.

Смывы с поверхностей проводят стерильным ватным тампоном,
укрепленным на стеклянном или металлическом держателе, вмонтированном в
ватно-марлевую пробку пробирки. В пробирке должно содержаться приблизительно 2
мл стерильной воды для инъекций.

В чашки Петри разливают по 20 - 25 мл питательной среды N 1 для
бактерий и среды N 2 для грибов и дрожжей (по ГФ изд. XI, вып. 2). Перед
исследованиями чашки с разлитой средой выдерживают в термостате в течение 1
суток при температуре от 30 до 35 °C. Проросшие чашки не используют.

Смывы проводят увлажненным тампоном с поверхности площадью от 24
до 30 кв. см.

После взятия пробы провести несколько раз по поверхности
питательной среды в двух параллельных чашках Петри со средой N 1 и N 2. После
отбора проб чашки Петри помещают в термостат для инкубации для среды N 1 при
температуре от 30 до 35 °C в течение 48 ч, для среды N 2 - от 20 до 25 °C в
течение 72 ч. После истечения срока инкубации проводят подсчет колоний на двух
параллельных чашках, делают мазки, фиксируют их и окрашивают по Граму,
микроскопируют.

На результаты тестирования могут повлиять следующие факторы:

- угол снятия пробы и давление тампона;

- присутствие остатков дезинфектантов на поверхностях;

- возможность повторного снятия мазка с того же участка
поверхности.

Контактные пластины готовятся с соответствующей плотной
питательной средой, разливая ее на специальные пластины или таким образом,
чтобы поверхность агара выступала над краем чашки Петри.

При исследовании снимают крышку с чашки и стерильная поверхность
питательной среды накладывается на гладкую ровную поверхность. После снятия
отпечатка эту поверхность необходимо обработать спиртом или любым другим
дезинфектантом для удаления остатков питательной среды. После инкубации в
соответствии со сроками и температурой для используемых сред (например, среды N
1 и N 2) проводят подсчет колоний и микроскопируют окрашенные по Граму мазки.

Метод контактных пластин подходит для тестирования гладких и
ровных поверхностей, таких, как рабочий стол, стены, пол или одежда персонала.

 

3. Методы определения микробной контаминации

одежды и перчаток персонала

 

3.1. Для определения микробной контаминации перчаток персонала
используют следующий метод.

Отпечатки пяти пальцев каждой руки делают на поверхность плотной
питательной среды, например среды N 1 и среды N 2 (параллельно). Чтобы касание
было полным, рекомендуется сделать скользящее движение пальцами по всей
поверхности агара. Руки после контакта с агаром тщательно обрабатывают спиртом.

Рекомендуется следующая частота тестирования: не менее одного
раза в рабочую смену для АПЗ, для других - от одного раза в неделю до одного
раза в месяц, в зависимости от степени автоматизации технологического процесса.

3.2. Микробная контаминация одежды персонала обычно определяется
на предплечьях с помощью контактных пластин. Также проверяются бахилы.

Можно применять метод смыва тампоном. Для этого делают смывы
увлажненным тампоном с 4 участков площадью по 25 кв. см каждый на нижней части
двух рукавов, верхней передней поверхности комбинезона (халата) и шлеме.

После тестирования одежда не должна более использоваться в АПЗ.

 

 

 

 

 

 

Приложение Б

 

АЭРОЗОЛЬНЫЕ ПРОБООТБОРНИКИ ДЛЯ КОНТРОЛЯ

БАКТЕРИАЛЬНОЙ КОНТАМИНАЦИИ ВОЗДУХА

 

В данном Приложении описан аэрозольный пробоотборник
"Флора-100", имеющий российский сертификат соответствия РОСС RU
ИМ04.Н.00128 N 02549128, выданный органом по сертификации АНО "Центр ЦСМИ
ВНИИ Медприбор". Пробоотборник рекомендуется для работы во всех классах
чистоты A, B (100), C (10000) и D (100000). Возможно применение любого
подобного пробоотборника отечественного и зарубежного производства, имеющего
сертификат соответствия и удовлетворяющего по диапазону пробоотбора
требованиям, предъявляемым уровню допустимой контаминации к классам чистоты A,
B (100), C (10000) и D (100000).

 

1. Область применения и ограничения по
использованию

пробоотборника "Флора-100"

 

1.1. Область применения

Определение концентрации жизнеспособных микроорганизмов при
проведении аттестации и текущего контроля классов чистоты воздуха в чистых
комнатах и чистых зонах.

1.2. Ограничения по применению

Рекомендации не распространяются на методы аттестации и контроля
уровня вирусологического загрязнения воздуха.

 

2. Устройство и принцип работы

пробоотборника "Флора-100"

 

Работа пробоотборника основана на разгоне воздушного потока с
помощью многосопловой решетки до высокой линейной скорости и инерционном
осаждении микроорганизмов на плотную питательную среду, установленную
перпендикулярно потоку.

 

3. Основные технические данные и характеристики

пробоотборника "Флора-100"

 

Пробоотборник рассчитан на эксплуатацию при температуре от 0 до
+50 °C при относительной влажности воздуха не более 80%.

Объемная скорость отбора пробы - 180 л/мин.

Режимы отбора проб - 25, 100, 250 и 2000 л.

    Диапазон измеряемых    
концентраций    
микроорганизмов     -

      4       -3

1 - 10 КОЕ x м  .

3.1. Метрологическая поверка

Требования по метрологической поверке должны указываться в
паспортных данных на прибор.

 

4. Конструкция пробоотборника
"Флора-100"

 

Пробоотборник оформлен в виде переносного портативного прибора,
состоящего из корпуса, в котором смонтированы блок управления на печатных
платах, аспиратор и аккумуляторные батареи, и съемной ситовой решетки. Корпус и
ситовая решетка выполнены из анодированного алюминиевого сплава. Лицевая панель
с органами управления смонтирована на корпусе и герметично закрыта гибкой
пластиной. Прибор снабжен съемным электрошнуром с блоком питания.

 

5. Меры безопасности

 

При подготовке прибора к работе необходимо блок питания
присоединить сначала к пробоотборнику, а затем включить в сеть. Съем ситовой
решетки и замену любого элемента производить после отключения прибора и полной
остановки двигателя аспиратора.

 

6. Подготовка пробоотборника "Флора-100"
к работе

 

1. В стерильные чашки Петри разлейте по 15 +/- 1 мл питательной
среды и оставьте для застывания на ровной горизонтальной поверхности.

2. Снимите защитную крышку сопловой решетки пробоотборника.

3. Поворотом против часовой стрелки снимите верхнюю часть корпуса
с сопловой решетки, увлажните ватным тампоном, смоченным в этиловом спирте, и
профламируйте на пламени горелки до полного сгорания спирта. В случае
повышенных требований к стерильности операций пробоотбора съемную часть корпуса
следует стерилизовать либо в автоклаве при t = 121 °C в течение 1 ч, либо в
сухожаровом шкафу при t = 160 °C в течение 1,5 ч.

4. Установите чашку с питательной средой в держатель
пробоотборника, установите верхнюю часть корпуса в исходное положение и
зафиксируйте ее поворотом по часовой стрелке.

5. Подключите блок питания к импактору и вставьте его в сеть
переменного тока 220 В, 50 Гц.

6. При питании пробоотборника от встроенной аккумуляторной
батареи (комплектуется по требованию заказчика) блок питания подсоединять к
пробоотборнику не следует.

 

7. Отбор пробы воздуха пробоотборником
"Флора-100"

 

1. Нажмите кнопку [СЕТЬ], расположенную на левой стенке
пробоотборника, при этом на передней панели пробоотборника загорится индикатор
"ВКЛ".

2. Нажмите кнопку, имеющую маркировку требуемого объема
отбираемого воздуха (25, 100, 250, 2000 л), при этом над кнопкой загорается
красный световой индикатор и появляется шум работающего аспиратора.

3. После отбора заданного объема воздуха индикаторная лампа
гаснет.

4. Порядок работы пробоотборника от аккумуляторной батареи и сети
переменного тока одинаков.

5. Внимание! При работе пробоотборника от аккумуляторной батареи
необходимо не допускать ее разряда ниже 10 В. При напряжении менее 10 В
возникает мигание зеленой индикаторной лампы с маркировкой "РАЗРЯД".

6. Для повторного отбора пробы воздуха необходимо установить в
импактор новую чашку Петри с питательным агаром (см. п. п. 6.2 - 6.6) и нажать
кнопку требуемого объема.

7. По окончании отбора нажмите кнопку [СЕТЬ], при этом питание
прибора отключается, индикаторная лампа "ВКЛ" гаснет.

8. После отбора пробы снимите верхнюю часть корпуса
пробоотборника с сопловой решеткой, извлеките чашку Петри, закройте ее крышкой
и поместите в термостат для инкубации. После инкубации проведите подсчет
колоний на поверхности питательной среды.

 

8. Обработка результатов

 

1. Для расчета концентрации микроорганизмов в воздухе определяют
наиболее вероятное число микробных частиц в пробе.

При количестве колоний, не превышающем 35, наиболее вероятное
число колониеобразующих единиц равно числу колоний. Если количество более 35,
наиболее вероятное число (Р) колониеобразующих единиц определяется по формуле:

 

                      1      
1               1

             P = N (----- + ----- + ... + ---------),

                    N - 1  
N - 2         N - n - 1

 

где:

N - количество отверстий в сопловой решетке (N = 367);

n - число колоний.

В таблице представлены значения наиболее вероятного числа
колониеобразующих единиц для пробоотборника "Флора-100" (см. табл.).

2. Концентрация микроорганизмов в пробе воздуха определяется
путем деления числа колоний или наиболее вероятного числа колониеобразующих
единиц на объем отобранной пробы.

 

Таблица

 




n 


p 


n 


p 


n 


p 


n 


p 


n 


p 


n 


p 




1 


2 


3 


4 


5 


6 


7 


8