ратуре от 30 до
35 °C в течение 24 ч для подтверждения их стерильности. Проросшие чашки
бракуют.

9.4. Ростовые свойства питательных сред должны быть проверены
соответствующими тест-штаммами (для среды N 1 и среды N 2 - по ГФ изд. XI, вып.
2, с. 208 "Требования к ростовым свойствам питательных сред").

9.5. При контроле поверхностей, предварительно обработанных
дезинфицирующими растворами, которые могут попадать в питательную среду и
ингибировать рост микроорганизмов, для инактивации действия химических агентов
необходимо добавлять в питательные среды нейтрализаторы, например твин-80,
лецитин или другие (см. ГФ изд. XI, вып. 2, с. 195 "Определение антимикробного
действия лекарственного средства").

 

10. Идентификация выделенных микроорганизмов

 

10.1. Все выявленные в процессе мониторинга окружающей среды
микроорганизмы подлежат обязательной макроскопической (форма, цвет,
консистенция колоний) и микроскопической идентификации окрашенных по Граму
мазков. Результаты исследований должны регистрироваться в документах, где
указывают основные морфологические признаки: отношение к окраске по Граму,
наличие или отсутствие спорообразования, форма микроорганизмов (кокки, палочки,
овоиды и т.д).

10.2. Кроме указанных методов морфологической идентификации
существуют также:

- биохимические тест-системы;

- идентификационные автоматизированные системы.

Производитель может по своему усмотрению применять любые
дополнительные современные методы идентификации микроорганизмов, в т.ч.
специальные дифференциальные среды для выявления определенных групп
микроорганизмов, или специальные методы, например метод двуслойного агара для
определения анаэробной контаминации.

10.3. При обнаружении споровых бактерий или грибов необходимо
проводить дополнительные меры дезинфекции помещений.

Идентификация дает возможность предположить источник
контаминации, основываясь на преимущественном распространении микроорганизмов
во внешней среде:

 




Микроорганизмы      


Пример      


Источник   




Грамотрицательные        


Pseudomonas       


вода            




Грамположительные
кокки  


Staphylococcus    


люди            




Грамположительные палочки


Propionibacterium 


люди, пыль      




Грамположительные палочки
(споры)                  


Bacillus          


пыль            




Плесень, дрожжи          


Aspergillus       


пыль            




 

10.4. Люди, участвующие в производственном процессе, также
являются источником контаминации. Ниже приведены группы микроорганизмов,
преимущественно встречающиеся в определенных участках тела человека:

 




Участки тела  
человека    


Группы
микроорганизмов          




Кожа              


Corynebacterium
Staphylococcus, Bacillus   




Нос               


Micrococcus,
Corynebacterium Staphylococcus




Подмышечные впадины


Micrococcus,
Corynebacterium, Sarcina      




Десны             


Streptococcus,
Corynebacterium             




 

11. Микробиологические условия и уровни действия

для контролируемой среды

 

В фармацевтической промышленности на протяжении многих лет
используются установленные уровни содержания микроорганизмов, связанные с классом
чистоты помещений - A (100), B (100), C (10000) и D (100000), классификация,
принятая ВОЗ и МСА (серия технических докладов Всемирной организации
здравоохранения N 823).

Данные уровни считаются достижимыми при использовании текущих
технологий для контролируемых сред и приведены в табл. 1.3, 4.1 (см. приложения
1, 4 Методических рекомендаций МУ 44-116 "Асептическое производство
медицинских иммунобиологических препаратов").

Значения, приведенные ниже в таблицах, дополняют и конкретизируют
требования к классам чистоты в отношении поверхностей оборудования и помещений,
одежды и рук персонала. Данные по колониеобразующим единицам (КОЕ) относятся к
неспорообразующим микроорганизмам. Присутствие спорообразующих бактерий, грибов
и дрожжей недопустимо. При их выявлении необходимо проведение дополнительных
мер по дезинфекции и выявлению источников контаминации.

 

РЕКОМЕНДУЕМЫЕ УРОВНИ ЧИСТОТЫ ПОВЕРХНОСТЕЙ

ОБОРУДОВАНИЯ И ПОМЕЩЕНИЯ ДЛЯ КОНТРОЛИРУЕМЫХ ЗОН

В КОЛОНИЕОБРАЗУЮЩИХ ЕДИНИЦАХ (КОЕ)

 




Класс   


КОЕ/контактная пластина
<*>          




B (100)   


2                                                





C (10000) 


5                                                

10 (на полу)                                     




    --------------------------------

<*> Площадь контактной пластины - от 24 до 30 кв. см.

 

При использовании смывов с поверхностей необходимо, чтобы площадь
снятия смыва была не менее 24 и не более 30 кв. см.

 

РЕКОМЕНДУЕМЫЕ УРОВНИ ЧИСТОТЫ ОДЕЖДЫ И РУК

ПЕРСОНАЛА, РАБОТАЮЩИХ В КОНТРОЛИРУЕМЫХ ЗОНАХ,

В КОЛОНИЕОБРАЗУЮЩИХ ЕДИНИЦАХ (КОЕ)

 




Класс 


КОЕ/контактная
пластина              




перчатки


маска, предплечья,
бахилы          
(общее на 1 человека)            




B (100) 


3  


5                       




C (10000)


10  


20                       




 

Приведенные в данной таблице уровни микробной контаминации одежды
и рук персонала устанавливаются на конец рабочей смены, при обычных рабочих
условиях. В начале рабочей смены одежда и перчатки должны быть стерильными.
Контроль стерильной одежды проводят 1 раз в две недели - непосредственно после
стерилизации одежды. Контролируют не менее 3 комплектов из каждой загрузки
автоклава.

 

12. Уровни тревоги и действия

и корректирующие мероприятия

 

Анализ результатов текущего контроля должен давать постоянную
оценку соответствия асептического процесса установленному уровню, т.е. удалось
ли достичь установленного класса чистоты для данного помещения.

В таблицах 4.1 и 4.2 (см. приложение 4 "Общий
микробиологический мониторинг" Методических рекомендаций МУ 44-116) приводятся
уровни действия для среды критических и некритических зон, а также мероприятия,
рекомендуемые в случае превышения данного уровня действия.

Программа корректирующих мероприятий при превышении
установленного уровня действия должна быть разработана каждым производителем
индивидуально, с учетом конкретных производственных условий, документально
оформлена. Протоколы заполняются результатами предусмотренных дополнительных
контролей, выводы проведенных расследований подписываются ответственными
лицами.

Уровни тревоги и действия должны периодически пересматриваться в
соответствии с модернизацией процессов или потоков и технологий.

 

13. Документация

 

Программа микробиологического мониторинга производственной среды
должна быть составлена в виде рабочего документа, включающего:

- инструкции, описывающие порядок проведения контролей элементов
производственной среды;

- планы помещений с указанием точек отбора проб;

- регулярность отбора проб;

- временные точки отбора проб в технологическом процессе;

- описание приборов, инструкции по их эксплуатации;

- описание используемых методов контроля;

- методы идентификации микроорганизмов;

- уровни тревоги и действия;

- программу корректирующих мероприятий;

- формы протоколов или журналов для регистрации результатов;

- фамилии ответственных исполнителей и контролирующего лица.

Формы протоколов контроля элементов производственной среды должны
отражать следующие параметры:

- дату и время проведения теста;

- название помещения (технологической стадии);

- метод тестирования;

- температуру и влажность помещения;

- дату последней калибровки инструмента;

- уровень активности в помещении;

- фамилию оператора, проводящего отборы проб;

- объем отобранной пробы воздуха или площадь, с которой взят
смыв;

- количество параллельных проб;

- температуру и время инкубации;

- результаты теста;

- дату получения результатов теста;

- сертификационные данные используемой питательной среды;

- идентификацию выявленных контаминантов (микроскопия окрашенных
по Граму мазков);

- фамилию оператора, проводящего оценку полученного результата;

- перечень предпринятых, если необходимо, мероприятий или ссылку
на протокол корректирующих действий.

 

 

 

 

 

 

Приложение А

 

МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ

 

В данном Приложении рассматриваются преимущества и недостатки
основных методов, используемых в микробиологическом мониторинге для
тестирования воздушной среды, рабочих поверхностей, одежды и рук персонала.

Приведенный в данных Методических рекомендациях список литературы
может помочь производителю в выборе приемлемых методов контроля.

 

1. Методы тестирования воздушной среды

 

Микроорганизмы потенциально всегда присутствуют в воздухе
контролируемой рабочей зоны, т.к. НЕРА-фильтры, используемые для очистки, не
имеют абсолютной 100% эффективности даже тогда, когда работают в
специфицированных условиях (класс чистоты A (100) и B (100)).

Основной целью микробиологического контроля воздуха асептической
зоны является определение уровня и спектра микробной контаминации, чтобы
оценить вероятность ее проникновения в производимый продукт.

Для контроля микробной контаминации воздуха применяют два метода
- пассивный (качественный) и активный (количественный).

К числу наиболее популярных приборов, используемых в активных
методах микробиологического контроля воздуха, относятся импакторы и
центрифужные пробоотборники, где применяется плотная агаровая питательная
среда.

Пассивный метод заключается в экспозиции открытой плотной питательной
среды в течение определенного периода времени. Главным недостатком метода
является выявление только больших быстрооседающих частиц и неопределенность в
объеме отобранной пробы. Фактически данный метод является качественным и
позволяет лишь определить спектр присутствующих микроорганизмов.

1.1. Активные методы и приборы для контроля микробной
контаминации воздуха

Для выбора приемлемого метода активного отбора проб следует
учитывать следующие факторы:

- ожидаемая концентрация КОЕ в воздушной среде;

- способность метода работать в условиях низкой концентрации КОЕ;

- чувствительность бактерий к процедуре пробоотбора;

- время и продолжительность отбора пробы;

- свойства прибора (эффективность, объемы проб);

- возможность деконтаминации прибора.

Выбор прибора и правильность его использования являются областью
ответственности производителя.

Наиболее часто в фармацевтической промышленности используются
щелевые импакторы и центрифужные пробоотборники типа RCS.

Учитывая приемлемость по основным характеристикам и удобство
использования, рекомендуется применять аэрозольные пробоотборники типа
"Флора-100" или Biotest RCS (см. Приложение Б "Аэрозольные
пробоотборники для контроля бактериальной контаминации воздуха").

1.2. Пассивный метод контроля микробной контаминации воздуха

Метод заключается в экс