Количество
животных
в группе


Название
групп 
животных




крысы, самцы   


2     


100 - 150  


10   


контроль
опыт   




 

Крысы обеих групп находятся на полусинтетическом рационе.

Контроль - крысам натощак вводят 1 мл водных растворов нитрита
натрия и пролина в дозах соответственно 15 и 50 мг/кг массы тела животного.
Опыт - крысам помимо нитрита натрия и пролина вводят натощак 1 мл раствора БАД
к пище. Крыс обеих групп помещают в обменные клетки на сутки для сбора мочи,
предварительно в сосуды для сбора мочи вносят 1 мл 30%-ного раствора гидроксида
натрия. Собранную мочу замораживают до минус 18 °C и хранят до проведения
анализа на содержание нитрозопролина (не более 10 дней). Содержание
нитрозопролина определяют по (79).

 

 

 

 

 

 

Приложение 2

к разделу "Парафармацевтики"

 

ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ

АКТИВНЫХ ДОБАВОК К ПИЩЕ, ПРЕДЛАГАЕМЫХ В КАЧЕСТВЕ

ЗАЩИТНЫХ СРЕДСТВ ОТ ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ

 

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НА КРЫСАХ

 




Количество
групп   
животных 


Количество
животных 
в группе 


Экспериментальные
группы      


Продолжительность
опыта      




2     


10    


контроль          
опыт              


30 дней     




 

Модель воздействия ионизирующего излучения

Крысы контрольной и опытной групп получают однократное общее
гамма - облучение в дозе 8 Гр на установке "Хизотрон" с источником Со
(Е - 1,25 МэВ) с расстояния 0,7 м.

После облучения контрольная группа крыс находится на общевиварном
рационе. Крысы опытной группы получают исследуемую БАД к пище вместе с кормом.

Ежедневно регистрируется гибель животных, взвешивание
производится каждые трое суток.

 

ХАРАКТЕРИСТИКА ПРОНИЦАЕМОСТИ КИШЕЧНОГО БАРЬЕРА

(ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НА КРЫСАХ)

 




Количество
групп   
животных 


Количество
животных 
в группе 


Экспериментальные
группы      


Продолжительность
опыта      




2     


10    


контроль          
опыт              


15 - 18 дней  




 

Модель воздействия ионизирующего излучения.

Крысы контрольной и опытной групп получают однократное общее
гамма - облучение в дозе 4 Гр на установке "Хизотрон" с источником Co
(Е - 1,25 МэВ) с расстояния 0,7 м.

Данная доза не вызывает гибели животных в ранний период и
характеризуется обратимыми изменениями в морфофункциональном состоянии
эпителиального барьера тонкой кишки. Животные опытной группы на протяжении 10 -
14 дней перед облучением и в течение 2 суток после облучения получают с кормом
исследуемую БАД к пище. Животные контрольной группы на протяжении всего
эксперимента получают общевиварный рацион.

Через сутки после облучения животным опытной и контрольной групп
вводят внутрижелудочно по 500 мг ПЭГ-4000 (Serva, Германия) и собирают мочу в
течение последующих 18 ч в обменных клетках. По окончании сбора мочи крысам
внутрижелудочно вводят по 500 мг куриного овальбумина (пятикратно
перекристаллизованного) и через 3 ч обескровливают под глубокой эфирной
анестезией. Препарат слизистой оболочки тощей кишки подвергают
морфометрическому исследованию на светооптическом уровне.

Из аликвоты мочи экстрагируют ПЭГ-4000 путем экстракции
10-кратным объемом перегнанного хлороформа. Хлороформ отгоняют и сухой остаток
анализируют методом гель - проникающей хроматографии с рефрактометрическим
детектированием в системе метанол - вода 1:1 (88). Содержание ПЭГ-4000 в пробах
определяют по стандартному графику. Параллельно в другой аликвоте мочи
анализируют содержание креатинина с помощью колориметрической реакции ЯФФЕ
(89). Проницаемость кишечного барьера для ПЭГ-4000 характеризуют величиной
экскреции ПЭГ-4000 с мочой в процентах от введенной дозы в расчете на 11 ммоль
экскретируемого креатинина. В сыворотке крови анализируют содержание антигенных
структур куриного овальбумина с помощью двухвалентного твердофазного иммуноферментного
метода (sandwich - ELISA), рекомендуемого как официальный метод ВОЗ (90).

Проницаемость кишечного барьера для нерасщепленного белка
характеризуется величиной его всасывания в кровь в процентах от внутрижелудочно
введенной дозы.

 

 

 

 

 

 

Приложение 3

к разделу "Парафармацевтики"

 

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ БАД

К ПИЩЕ, РЕКОМЕНДУЕМЫХ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ

И ВСПОМОГАТЕЛЬНОЙ ТЕРАПИИ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

ПЕЧЕНИ

 

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

НА КРЫСАХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МОДЕЛИ ПОДОСТРОГО

ТОКСИЧЕСКОГО ГЕПАТИТА

 




Количество
групп крыс


Количество 
крыс в группе


Контроль  


Опыт-1 


Опыт-2   




3    


16     


общевиварный 
рацион       


модель  
гепатита


модель гепати-
та на фоне   
введения изу-
чаемой БАД   




 

Модели подострого гепатита:

- крысам вводится подкожно четыреххлористый углерод в дозе 2
мл/кг массы крысы в смеси с подсолнечным маслом 1:1 через день на протяжении
одного месяца (91);

- пятикратное через 2 ч введение (внутримышечное) 50%-ного
раствора тетрахлорметана в оливковом масле по 0,3 мл на 0,1 кг массы тела крысы
(82).

Опыт-1 - 1-й месяц крысы находятся на общевиварном рационе первые
3 недели, далее - получение модели токсического гепатита (срок в зависимости от
вида модели); 2 - 3-й месяц - на общевиварном рационе.

Опыт-2 - 1-й месяц крысы находятся на общевиварном рационе с
введением в него изучаемой БАД к пище первые три недели, далее - получение
модели токсического гепатита (срок в зависимости от вида модели); 2 - 3-й месяц
- на общевиварном рационе с введением в него изучаемой БАД к пище.

Контроль - 1-й, 2-й и 3-й месяцы крысы находятся на общевиварном
рационе.

Забои животных проводятся: 1-й забой (забивают половину крыс из
каждой группы, 6 - 8 животных) сразу после получения модели гепатита, 2-й -
через 3 - 4 недели после первого забоя (вторая половина животных из каждой
группы).

Экспериментальные исследования, рекомендуемые для оценки данного
вида БАД: интегральные показатели, т.е. внешний вид животных, активность, масса
тела, абсолютная и относительная масса внутренних органов.

 

БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ

 




Показатель     


Метод           


Литературный
источник 




Аланинаминотрансфераза


Спектрофотометрический     


(92)   




Сорбитолдегидрогеназа


Спектрофотометрический     


(93)   




Альдолаза            


Спектрофотометрический     


(94)   




Орнитинкарбомоилтранс-
фераза               


Спектрофотометрический     


(95)   




Холинэстераза        


Спектрофотометрический     


(96)   




Билирубин            


Унифицированный метод      
по диазореакции в присут-  
ствии акселератора         


(97)   




Щелочная фосфатаза   


Спектрофотометрический     


(98)   




Лактатдегидрогеназа  


Спектрофотометрический     


(99)   




Белковые фракции     


Электрофорез               


(27)   




 

Морфологические методы: макро- и микроскопическое исследование
печени.

Модели патологического состояния печени представлены также в
следующих работах: острый тетрациклиновый гепатоз у крыс (83), хронический
гепатит (8), цирроз печени (117), другие модели токсического гепатита (85 -
86).

 

 

 

 

 

 

Приложение 4

к разделу "Парафармацевтики"

 

ОЦЕНКА

ЭФФЕКТИВНОСТИ БАД К ПИЩЕ,

РЕКОМЕНДУЕМЫХ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И В КАЧЕСТВЕ

ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ СРЕДСТВ ПРИ ЛЕЧЕНИИ

СЕРДЕЧНО - СОСУДИСТЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

 

Модели гиперлипиемий.

1. Крысы - введение детергентов (тритон WR-1339 225 - 250 мг/кг
массы тела внутрибрюшинно однократно). Через 8 - 10 ч после введения тритона
WR-1339 наблюдается 6 - 8-кратное увеличение уровня триглицеридов в крови и 3 -
4-кратное увеличение содержания холестерина (126).

2. Крысы - применение диеты, содержащей 3 - 5% холестерина, 0,3%
тиоурацила, 1% холевой кислоты. Дополнительно можно ввести витамин Д.
Гиперлипидемия возникает через 3 - 4 недели. Длительное применение этой диеты с
витамином Д (несколько месяцев) приводит к атеросклеротическому поражению аорты
(126).

3. Морские свинки - применение диеты, содержащей 1,6% холестерина
и 15% растительного масла. Через 6 - 10 дней развивается гиперлипидемия,
усиливающаяся при более длительном применении диеты (126).

4. Кролики - применение диеты, содержащей 0,2 - 0,3 г/кг
холестерина или введение холестерина зондом в подсолнечном масле в желудок в
том же количестве (126).

При изучении БАД к пище, рекомендуемой в качестве
вспомогательного или профилактического средства при лечении сердечно -
сосудистых заболеваний, в эксперименте на животных можно рекомендовать
следующие показатели для характеристики эффективности:

- интегральные показатели состояния животных - внешний вид,
активность, масса тела, относительная масса внутренних органов;

- специальные показатели - артериальное давление,
электрокардиографическое исследование.

 

БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ

 




Показатели              


Литературный источник




Фибриноген                              


(114)                




Фибринолитическая
активность            


(114)                




Протромбиновый индекс и
другие          
показатели системы гемакоагуляции