Фосфор неорганический


Колориметрический          


(35)  




Натрий, калий, магний,
железо, цинк, медь,  
хром, молибден       


Атомно -
абсорбционный     


(41)  




Селен                


Спектрофлюориметрический   


(42)  




 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИНЕРАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

В БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ

 




Показатель     


Метод           


Литературный
источник 




Кальций              


Визуальное титрование
с    
кальцеином (кровь, моча)   


(35)   




Фосфор неорганический


Колориметрический          


(35)   




Натрий, калий, магний,
железо, цинк, медь,  
хром, молибден       


Атомно -
абсорбционный     
(кровь, моча)              


(41)   




Селен                


Спектрофлюориметрический   


(42)   




 

 

 

 

 

 

Приложение 6

к разделу "Нутрицевтики"

 

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ БИОЛОГИЧЕСКИ

АКТИВНЫХ ДОБАВОК К ПИЩЕ, СОДЕРЖАЩИХ ЖЕЛЕЗО

 

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НА КРЫСАХ

 




Количество
групп крыс


Количество
крыс  
в группе


Эксперимен-  
тальные группы


Продолжитель-
ность опыта 


Исходная  
масса крыс, г




3    


8 - 10 


контроль     
опыт-1       
опыт-2       


2 - 3 месяца


30 - 50  




 

Описание групп крыс:

- контроль - контрольная группа крыс находится на обычном
полусинтетическом рационе;

- опыт-1 и опыт-2 - у этих групп животных создается модель
алиментарной железодефицитной анемии. Для этого крысы этих групп рассаживаются
в специальные клетки (пластмассовые клетки без каких-либо железосодержащих
составляющих с прорезями внизу, что исключает копрофагию у крыс) и получают
корм, из которого полностью исключено железо (при необходимости отдельные
компоненты полусинтетического рациона максимально отмывают от железа). Состав
экспериментального рациона: казеин - 22%, подсолнечное масло (рафинированное) -
10%, кукурузный крахмал - 60,7%, целлюлоза - 3%, солевая смесь - 0,1 % (без
добавления железа), витаминная смесь - 0,1%, холинхлорид - 0,2%. С подсолнечным
маслом в корм вносится ретинолпальмитат и витамин Д. Весь рацион готовится на
деионизированной воде, эту же воду в ходе эксперимента используют в качестве
питьевой воды. Скорость и глубину развития железодефицитной анемии
контролируют, определяя концентрацию гемоглобина в периферической крови. При
снижении концентрации гемоглобина ниже 90 г/л считается, что у животных имеется
железодефицитная анемия. Для ее подтверждения часть животных из группы опыт-1
забивают и определяют: концентрацию гемоглобина в периферической крови,
концентрацию железа в сыворотке крови, общую железосвязывающую способность
сыворотки крови и рассчитывают коэффициент насыщения трансферрина, содержание
железа в сыворотке в печени крыс, количество эритроцитов в периферической
крови, мазок крови на наличие анизо- и пойкилоцитоза. При подтверждении
железодефицитной анемии животным группы опыт-2 в корм вносят исследуемую
биологически активную добавку к пище (с соответствующим расчетом на содержание
железа). Восстановление статуса железа в организме крыс в дальнейшем ходе
эксперимента оценивают по концентрации гемоглобина в крови. При восстановлении
концентрации гемоглобина в крови до величин, имеющих место у контрольной группы
животных, экспериментальных животных забивают и определяют гематологические и
биохимические показатели, характеризующие состояние обмена железа в организме.
Важно определить содержание железа в печени, т.к. этот показатель характеризует
запасы железа в организме.

 

 

 

 

 

 

Приложение 7

к разделу "Нутрицевтики"

 

БИОЛОГИЧЕСКИЕ АКТИВНЫЕ ДОБАВКИ К ПИЩЕ,

СПОСОБСТВУЮЩИЕ ВЫВЕДЕНИЮ ИЗ ОРГАНИЗМА ЧУЖЕРОДНЫХ

И ТОКСИЧНЫХ ВЕЩЕСТВ, ПРОДУКТОВ ОБМЕНА ВЕЩЕСТВ

 




Показатель     


Метод           


Литературный
источник 




Определение содержания
цитохрома Р-450 в ор-
ганах эксперименталь-
ных животных         


Спектрофотометрический     


(46)   




Определение активности
о-демитилирования ами-
допирина             


Спектрофотометрический     


(47)   




Определение активности
о-демитилирования    
р-нитроанизола       


Спектрофотометрический     


(48)   




Определение гидрокси-
лирования 3,4-бензпи-
рена                 


Спектрофлюориметрический   


(49)   




Определение о-диэтили-
рования 7-этоксикума-
рина                 


Спектрофлюориметрический   


(50)   




Определение о-диэтили-
рования 7-этоксирезо-
фурина               


Спектрофлюориметрический   


(51)   




Определение активности
лизосомальных фермен-
тов: арилсульфатазы А
и В, бета - галактози-
даза, бета - глюкуро-
нидаза, альфа - манно-
зидаза, бета-N-ацетил-
глюкозаминидаза в    
сыворотке крови и    
органах лабораторных 
животных             


Спектрофотометрический,    
спектрофлюориметрический   


(52)   




Определение активности
эпоксидгидролазы в   
субклеточных фракциях
печени и слизистой   
тонкой кишки         


Спектрофлюориметрический   


(53)   




Определение активности
УДР-глюкоуронозил-   
трансферазы          


Спектрофотометрический
и   
спектрофлюориметрический   


(54)   




Определение активности
карбоксилэстеразы в  
субклеточных фракциях
и слизистой тонкой   
кишки                


Спектрофотометрический     


(55)   




 

 

 

 

 

 

Приложение 1

к разделу "Парафармацевтики"

 

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ

БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК

К ПИЩЕ, ПРИМЕНЯЕМЫХ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ

ОБРАЗОВАНИЯ N-НИТРОЗАМИНОВ

 

Известно, что наличие в пищевых продуктах азотсодержащих
соединений (аминов, амидов, алкилмочевин и др.), а также нитратов и нитритов
может приводить к образованию канцерогенных N-нитрозаминов как в пищевом
продукте, так и в организме, причем компоненты, входящие в состав пищевого
продукта, могут усиливать, замедлять или полностью ингибировать этот процесс.
БАД к пище, являющиеся в основном высокоактивными соединениями, могут играть важную
роль как в экзогенном, так и в эндогенном образовании канцерогенных
N-нитрозаминов. В связи с этим оценка эффективности применяемых БАД к пище как
ингибиторов образования канцерогенных N-нитрозаминов имеет важное значение.

 

Оценка эффективности ингибирования

нитрозирования в условиях IN VITRO

 

В среду, состоящую из 5 мл натурального желудочного сока pH 0,8 -
1,0, 0,5 мл водного раствора нитрита натрия (концентрация 30 мг/мл ) и 0,5 мл
диэтиламина (концентрация 46,7 мг/мл), вносят 1 мл раствора БАД к пище (БАД к
пище растворяется в соответствующем растворителе, концентрация БАД выбирается в
зависимости от рекомендуемой дозировки), энергично перемешивают до полного
растворения, доводят pH раствора до 4,5 добавлением 0,1 н раствора соляной
кислоты или 0,1 н раствора гидроокиси натрия. Контрольный опыт проводят
аналогично, но вместо раствора БАД к смеси желудочного сока и предшественников
нитрозаминов добавляется 1 мл соответствующего растворителя. Смеси (опыт и
контроль) термостатируются при 37 °C в течение 30 мин. Реакцию останавливают
добавлением 0,1 н раствора гидроокиси натрия (pH 8 - 9). Образовавшиеся
нитрозамины извлекают из смеси экстракцией свежеперегнанным метиленхлоридом.

Объединенные экстракты высушивают прокаленным сульфатом магния,
концентрируют и проводят идентификацию и количественное определение
нитрозаминов хемилюминисцентным методом (80) и (41).

 

ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ИНГИБИРОВАНИЯ

НИТРОЗИРОВАНИЯ В УСЛОВИЯХ IN VIVO

 




Вид      
животных   


Количество
групп   
животных 


Исходная масса
животных, г 


Количество
животных
в группе


Название
групп 
животных




крысы, самцы   


2     


100 - 150  


10   


контроль
опыт   




 

Крысы обеих групп (контроль и опыт) находятся на
полусинтетическом рационе. Каждому животному контрольной и опытной группы
натощак вводят желудочным зондом последовательно по 1 мл водных растворов
нитрита натрия (в пересчете на нитрит-ион) и диэтиламина в дозах соответственно
15 и 24 мг/кг массы крысы. Животным опытной группы, помимо предшественников,
вводят 1 мл БАД к пище. Животным контрольной группы - 1 мл соответствующего
растворителя, используемого для растворения БАД к пище. Ровно через 30 мин.
после введения растворов всех животных забивают, отделяют желудок вместе с
содержимым, помещают в жидкий азот. Анализ N-нитрозаминов осуществляют
хемилюминисцентным методом (81) и (41).

 

НИТРОЗОПРОЛИНОВЫЙ ТЕСТ

 




Вид      
животных   


Количество
групп   
животных 


Исходная масса
животных, г