с металлическим блеском и по 2 - 3 колонии
засевают в лактозный бульон с борной кислотой или желчно-лактозный бульон с
бриллиантовым зеленым. Среда должна быть нагрета на водяной бане до температуры
44° C. Засеянные пробирки вместе с водяной баней переносят в термостат и
инкубируют при температуре 44 +/- 0,5° C. Ферментация лактозы с образованием
кислоты и газа при 43 - 44 +/- 0,5° C в течение 24 часов подтверждает наличие
фекальных колиформных бактерий.

4.1.2.5. Определение синегнойной палочки

Синегнойная палочка
потенциально-патогенная, грамотрицательная облигатно-аэробная, не образующая
спор палочка с единичными, полярно расположенными жгутиками, обладает
оксидазной активностью, расщепляет глюкозу до кислоты, растет при температуре
42° C, образует сине-зеленый пигмент, относится к семейству Pseudomonaceae.

На среде
"Блеск" колонии синегнойной палочки темно-красного цвета, плоские,
покрытые золотистым налетом или содержат золотистые вкрапления. Культура
синегнойной палочки издает специфический ароматический цветочный запах. На
среде Эндо ее колонии плоские, с неровными краями, от бледно-сиреневого до
темно-сиреневого цвета.

Для выделения
синегнойной палочки типичные 2 - 3 колонии со среды Эндо или Блеск
микроскопируют. Грамотрицательные колонии пересевают уколом в среду
Хью-Лейфсона (О/Ф), а также бляшки производят посев на среду Кинг А. Посевы со
средой О/Ф и Кинг А инкубируют при температуре 37° C в течении 24 - 48 часов.

На среде Кинг А
колонии синегнойной палочки плоские, с неровными краями, характерно наличие
окрашивающего пигмента, который образуется вокруг колоний и диффундирует в
толщу среды. P.aeruginosa на среде О/Ф окисляет глюкозу, но не ферментирует ее,
при этом первоначальный зеленый цвет среды О/Ф изменяется в верхней части
столбика на желтый, нижняя часть остается зеленой. Результат учитывается как
О/Ф (+/-). P.aeruginosa изменяет среду О/Ф в желтый цвет и учитывается как
(+/-).

Типичные колонии,
выросшие на среде Кинг А, исследуют на оксидазный тест (п. 4.1.2.7). При
наличии оксидазоположительных бактерий, оксидирующих глюкозу на среде О/Ф и
продуцирующих пигмент, их относят к P.aeruginosa.

Апигментные колонии
исследуют на подвижность, наличие нитратредуктазы и свободного азота. Для
определения подвижности колоний бактерий сеют уколом в толщу 2% агара, сверху
заливают 0,5% агаром, чашки оставляют при комнатной температуре, не
переворачивая в течение 24 часов.

Веерообразный рост
бактерий вокруг укола на поверхности агара свидетельствует о подвижности.
Параллельно атипичные колонии сеют уколом в нитратную среду, после чего
помещают в термостат и инкубируют при 42° C 24 часа. В результате развития
P.aeruginosa происходит помутнение среды и наличие свободного азота в виде пены
на поверхности среды и иногда пузырьков газа в толще среды.

4.1.2.6. Определение
общего количества бактерий в воде

В 1 куб. см воды
определяется содержание мезофильных, мезотрофных аэробов и
факультативно-анаэробных микроорганизмов, выросших на питательном агаре (МПА)
при температуре 30 +/- 0,5° C за 48 - 72 часа. Из каждой пробы воды должен быть
сделан посев не менее двух различных объемов, выбранных с таким расчетом, чтобы
на чашках выросло от 30 до 300 колоний. При анализе карбонизированной воды (из
бутылок с линии розлива) отбирают объем около 50 куб. см в стерильную емкость,
встряхивают несколько раз и оставят на 5 - 10 минут для дегазации. Пробирка или
колба должна быть закрыта при этом ватно-марлевой стерильной пробкой.

Объемы минеральной
воды по 1 куб. см засевают на 2 чашки Петри. Для посева 0,1 куб. см и меньших
объемов используют разведения анализируемой воды. Посев каждого разведения воды
производят также не менее чем на 2 чашки Петри по 1 куб. см из соответствующих
разведений.

После внесения воды в
чашки Петри ее заливают расплавленным и остуженным до 45° C 1,8 - 2,0% МПА в
количестве 10 - 12 куб. см. Воду быстро смешивают с агаром, наклоняя или вращая
чашку по поверхности стола. После застывания агара чашки помещают в термостат и
инкубируют при температуре 30° C в течение 48 - 72
часов. Оценивая только те разведения, при посеве которых на чашке выросло от 30
до 300 колоний. При посеве 1 куб. см неразведенной пробы учитывают любые
количества колоний, но не превышающие 300. Подсчитанное число колоний на каждой
чашке делят на объем воды в куб. см, засеянный на те чашки, на которых велся
подсчет и вычисляют среднее арифметическое. Результат выражают в числе колоний
в 1 куб. см исследуемой воды, округляя до 2-, 3-значных чисел.

Если в чашке с
наиболее высоким разведением выросло свыше 300 колоний и анализ нельзя
повторить, то допустимо вести подсчет с помощью счетной пластинки, разделенной
на квадраты или трафарета, делящего чашку на сектора. Подсчитывают не менее 1/4
площади чашки в разных местах с последующим пересчетом на всю площадь чашки.
Если рост подвижных бактерий распространился на всю поверхность чашки, в
протоколе анализа отмечают "ползучий рост".

4.1.2.7. Постановка
оксидазного теста

Оксидазный тест
позволяет дифференцировать бактерии семейства Enterobacteriaceae от
Pseudomonaceae (последние являются оксидазоположительными бактериями). Все
посиневшие колонии или с синим ободком из учета исключаются.

При работе методом
мембранных фильтров, фильтр с выросшими на нем колониями бактерий переносят
пинцетом, не переворачивая на кружок фильтровальной бумаги несколько большего
диаметра, чем фильтр, обильно смоченный реактивом для определения оксидазной
активности бактерий. Через 2 - 4 минуты определяют результат. Колонии, не
изменившие своего первоначального цвета, в подавляющем большинстве образуются
бактериями группы кишечной палочки.

Учитывая
бактерицидное действие реактива для определения оксидазной активности,
мембранный фильтр сразу же после четкого появления реакции переносят обратно на
среду Эндо и немедленно (не позднее чем через 5 минут) пересевают.

При использовании
титрационного метода по 2 - 3 изолированные колонии каждого типа, выросших на
секторах среды Эндо, снимают петлей или стеклянной палочкой и наносят штрихами
на фильтровальную бумагу, смоченную реактивом для определения оксидазного
теста. Оксидазный тест считается отрицательным, если в месте нанесения
бактериальной массы бумага не изменяет цвета. Если в течение 1 минуты бумага
синеет - оксидазный тест положительный.

Если оксидазный тест
проявляется недостаточно четко, то для подтверждения результата изолированные
колонии можно пересеять на скошенный питательный агар и после подращивания
повторить оксидазный тест. Оксидазный тест также можно проводить системой
индикаторных бумажек (СИБ).

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Приложение 4.2

(Обязательное)

 

СПОСОБ
ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЯ ВОДОЗАБОРНЫХ СООРУЖЕНИЙ

МИНЕРАЛЬНОЙ
ВОДЫ, СРЕДСТВ ЕЕ ТРАНСПОРТИРОВКИ

И
БАЛЬНЕОТЕХНИЧЕСКОГО ОБОРУДОВАНИЯ

 

    4.2.1.
Полигексаметиленгуанидин   
гидрохлорид    (ПГМГ)   или

полисепт   (C  H 
3Cl)   -  водорастворимый   полимерный   продукт

             7  16    n

применяется   в    качестве    дезинфицирующего   
средства    для

обеззараживания   
бальнеосистем    курортов.    Препарат  
должен

соответствовать требованиям ТУ 10-09-481:87,  разрешен 
Минздравом

России   для   широкого  
применения   в   качестве  
антисептика.

(Методические  
указания  по  применению 
средства  полисепт   для

дезинфекции,  
М.,  1989).  Дезинфектант  производится  Покровским

заводом биопрепаратов и выпускается в виде  гранул 
или  брикетов,

или в виде 25% раствора во флаконах.

4.2.2. Водный
растворы полисепта обладают высокими бактерицидными свойствами в отношении
грамположительной и грамотрицательной микрофлоры, в частности, синегнойной
инфекции.

По скринингу
токсикологических, микробиологических и санитарно-химических свойств препарат
отнесен к классу малоопасных соединений и рекомендован также для
обеззараживания питьевой воды в определенных концентрациях (Гигиенический
сертификат N 1В-11/847 полигексаметиленгуанидин (ПГМГ) (флокулянт), 29 июля 1994
г.).

Бактерицидное
действие полисепта в растворе возрастает с увеличением pH и температуры.
Максимальная активность наблюдается при pH 10 - 11 и температуре 50 - 60° C. В
водных растворах бактерицидный эффект зависит от концентрации полисепта и
времени контакта. Растворы полисепта сохраняют бактерицидную активность в
течение 1 года.

4.2.3. Для
практического применения в условиях обеззараживания бальнеотехнического
оборудования используют 0,1% водный раствор полисепта. Дезинфекция оборудования
проводится после слива минеральной воды, далее дезинфицируемые системы заливают
0,1% водным раствором полисепта и оставляют на контакт не менее 1 часа. Затем
рабочий раствор сливают, систему промывают водопроводной водой, отбирают
промывные воды на бактериологический анализ и остаточное содержание
дезинфектанта (Приложение 4.3).

4.2.4. При отсутствии
полисепта обеззараживание бальнеотехнического оборудования и систем проводится
одним из существующих дезинфектантов (таблица 3).

 

                                                         Таблица 3

+----------------------------------------------------------------+

¦ N ¦    
Препарат    ¦   Стандарт   
¦ Применяемая концентрация ¦

¦  
¦                 ¦               ¦         раствора         ¦

+---+-----------------+---------------+--------------------------¦

¦ 1
¦        2        ¦       3       ¦             4            ¦

+---+-----------------+---------------+--------------------------¦

¦1. ¦Хлоридная известь¦ГОСТ 1692-85   ¦2,0 - 4,0% при  содержании¦

¦   ¦          
      ¦              
¦активного хлора,  не менее¦

¦  
¦                 ¦               ¦25,0%. В случае уменьшения¦

¦  
¦                 ¦               ¦концентрации     активного¦

¦  
¦                 ¦               ¦хлора  в исходном веществе¦

¦   ¦                 ¦               ¦необходимо делать соответ-¦

¦  
¦                 ¦               ¦ствующий перерасчет       ¦

¦   ¦                 ¦               ¦                          ¦

¦2. ¦Гипохлорид натрия¦ГОСТ 11086-76  ¦0,1 - 0,5 г/куб. дм       ¦

¦  
¦                 ¦               ¦(по активному хлору)      ¦

¦   ¦                 ¦              
¦                          ¦

¦3. ¦Катамин-АБ       ¦ТУ 6-01-816-75 ¦0,5
- 0,1%                ¦

¦   ¦                 ¦              
¦                          ¦

¦4. ¦Сульфохлорантин  ¦ТУ 6-01-746-72 ¦0,25 - 0,5%               ¦

+----------------------------------------------------------------+

 

Время экспозиции для
всех дезинфицирующих растворов не менее 1 часа. После дезинфекции промывка
оборудования от дезинфицирующего раствора питьевой водой до полного его
исчезновения. Для контроля, после дезинфекции отбирают последние порции
промывных вод для бактериологического анализа.