агар с мочевиной
готовят смешением следующих ингредиентов:

     Дистиллированная вода                         - 100,0 см3

     Сухой питательный агар                        - 2,5 г

     Лактоза                                       - 1,0 г

     Сахароза                                      - 1,0 г

     Глюкоза                                       - 0,1 г

     Мочевина                                      - 1,0 г

     Железо сернокислое (FeSO4-7H2O)               - 0,02 г

     Натрий серноватистокислый

     (Na2S2O3 x 5H2O)                              - 0,03 г

     0,04%-ный водный раствор фенолового

     красного                                      - 0,04 см3

 

Тщательно перемешивают и
устанавливают активную кислотность (7,3±0,1) ед рН. Разливают в пробирки по 5,0
см3 и стерилизуют текучим паром по 20 мин 3 дня подряд. После
стерилизации среду скашивают таким образом, чтобы высота столбика была не менее
3 см. Готовая среда имеет бледно-розовый цвет.

6.2.3.8.
0,4%-ный водный раствор фенолового красного.

Взвешивают 0,1 г индикатора
фенолового красного, вносят в колбу, вместимостью 50 см3, и вливают
25,0 см3 дистиллированной воды. Тщательно перемешивают до полного
растворения. Раствор хранят в холодильнике до 7 суток.

Для получения 0,04%-ного
рабочего раствора индикатора 1,0 см3 0,4%-ного раствора смешивают с
9,0 см3 дистиллированной воды.

6.2.3.9.
Среда Ресселя из сухих питательных сред.

К 950,0 см3
дистиллированной воды добавляют 40 г сухого питательного агара с лактозой и
индикатором ВР и 5 г питательного агара. Смесь растворяют при нагревании до
кипения. Затем в 50,0 см3 дистиллированной воды растворяют 1 г химически
чистой глюкозы и добавляют к приготовленной смеси.

Разливают в стерильные
пробирки но 5,0-6,0 см3 и стерилизуют текучим паром 3 дня подряд но
(30±1) мин или однократно при (111±1)°С в течение (30±1) мин. Среду скашивают
так, чтобы остался небольшой столбик (не менее 3 см высотой).

6.2.3.10.
Среда Клиглера из сухих питательных сред.

Среду готовят и стерилизуют
согласно прописи на этикетке. Готовую среду скашивают в пробирках так, чтобы
остался небольшой столбик (не менее 3 см высотой).

6.2.3.11. Диагностическая
поливалентная агглютинирующая адсорбированная сальмонеллезная сыворотка.

Необходимые разведения
сыворотки готовят перед использованием согласно прилагаемой к коробке
инструкции.

 

6.2.4.
Среды и реактивы для обнаружения стафилококков

 

6.2.4.1.
Солевой бульон.

К 100,0 см3
мясо-пептонного бульона (МПБ) с активной кислотностью (7,3±0,1) ед рН в колбе,
вместимостью 200 см3, добавляют 6,5 г хлористого натрия и разливают
в пробирки но 10,0 см3. Стерилизуют в автоклаве при (121±1)°С в
течение (20±1) мин.

6.2.4.2. Бульон солевой и
агар солевой - сухая питательная
основа для приготовления желточно-солевого или молочно-солевого агара -
промышленного производства. Подготовку сред для посевов проводят согласно
прописи на этикетке.

6.2.4.3.
Агар типа Байрд-Паркер.

Основа среды: 30 г сухого
питательного агара на основе ферментативного гидролизата кормовых дрожжей,
размешивают в 1,0 дм3 дистиллированной воды, добавляют 10 г пирувата
натрия, 5 г хлористого лития, тщательно перемешивают. Смесь нагревают при
помешивании и кипятят в течение 1 минуты до полного растворения ингредиентов.
Устанавливают активную кислотность (7,1±0,1) ед рН. Разливают во флаконы
объемами 100-200-300 см3 в зависимости от потребности и стерилизуют
при (121±1)°С в течение (15±1) мин. Основа среды может храниться в течение
месяца в условиях холодильника. Перед употреблением в растопленную и
охлажденную (45-50)°С основу, с соблюдением правил асептики прибавляют (из
расчета на 100,0 см3 среды) 0,5 см3 2%-ного раствора
теллурита калия и 5,0 см3 эмульсии яичного желтка. Среду тщательно
перемешивают и разливают в чашки Петри, в объеме, не менее 20,0 см3
на чашку. Чашки со средой могут быть использованы в течение 24-48 часов. Перед
посевом чашки со средой подсушивают в термостате общепринятым способом.

6.2.4.4. Агар типа
Байрд-Паркера - арбитражная
среда промышленного производства в сухом виде.

6.2.4.5.
Желточно-солевой агар (ЖСА).

Основа - солевой агар: к
мясо-пептонному бульону (МПБ) с активной кислотностью (7,3±0,1) ед рН добавляют
2% агара и 6,5% хлористого натрия, расплавляют на водяной бане, при
необходимости фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают мерным цилиндром
по 100,0 см3 в колбы, вместимостью 250 см3, и стерилизуют
при (121±1)°С в течение (3±1) мин. Вместо мясо-пептонного бульона можно
использовать сухой питательный агар на основе килечного гидролизата,
приготовленный по прописи на этикетке.

ЖСА: на 100,0 см3
стерильного расплавленного и остуженного до (45±1)°С солевого агара добавляют
20,0 см3 эмульсии яичного желтка. После полного размешивания
желточно-солевой агар разливают в стерильные чашки Петри по 20,0-25,0 см3
и хранят в холодильнике до 5-7 дней.

6.2.4.6.
Эмульсия яичного желтка.

На дно стерильной чашки Петри
помещают куриное яйцо, которое тщательно протирают ватой, смоченной этиловым
спиртом. Стерильным пинцетом пробивают с двух противоположных сторон яйца два
отверстия. Через одно из этих отверстий из яйца полностью удаляют белок, а
затем, несколько увеличив отверстие, выливают желток в стерильную колбу,
вместимостью 200 см3. К желтку постепенно добавляют (частями по
20,0-30,0 см3) 50,0 см3 стерильного физиологического
раствора, затем содержимое тщательно встряхивают до получения гомогенной массы.

6.2.4.7.
Нитратная плазма кролика.

Цитратная плазма кролика для
реакции плазмокоагуляции выпускается в сухом виде. Готовят непосредственно
перед употреблением согласно прописи в прилагаемом наставлении.

 

6.2.5. Среды
и реактивы для обнаружения В. cereus

 

6.2.5.1.
Среда Донована.

К 1,0 дм3
расплавленного питательного или мясо-пептонного агара добавляют 2,5 г
трехзамещенного цитрата натрия, 2,5 г хлористого лития, стерилизуют при
(110±1)°С в течение (30±1) мин, охлаждают до 45-50°С, добавляют 200000 ЕД
полимиксина "М" и эмульсию двух желтков. Тщательно перемешивают и
разливают в чашки Петри, которые можно хранить в холодильнике не более 7-10
суток.

6.2.5.2.
Эмульсия яичных желтков для среды Донована.

Асептически отделяют от яиц 2
желтка, как описано в п.6.2.4.6. К желткам добавляют 100,0 см3
стерильного физиологического раствора, тщательно встряхивают для получения
гомогенной массы.

6.2.5.3. Солевой
полимиксиновый агар с 2,3,5-трифенилтетразолием хлористым.

К 1,0 дм3 2%-ного
питательного или мясо-пептонного агара добавляют 60 г хлористого натрия, 200000
ЕД полимиксина "М", 0,1-0,2 г 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого,
эмульсию 2-х желтков.

Полимиксин,
2,3,5-трифенилтетразолий хлористый и эмульсию желтков асептично добавляют в
агар после расплавления и охлаждения до 40-45°С, хорошо перемешивают и
разливают в чашки Петри. Хранят среду в холодильнике не более 7-10 суток.

6.2.5.4.
Кровяной агар.

К 100,0 см3
расплавленного и остуженного до 40-45°С с 2% мясо-пептонного агара добавляют
5,0 см3 дефибринированной крови *(3) человека, барана или кролика,
тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри. Приготовленную
среду хранят в холодильнике до 5 суток.

6.2.5.5.
Среда с маннитом.

В дистиллированную воду
прибавляют 1% пептона и 0,5% хлористого натрия. Растворяют при нагревании,
прибавляют 0,1% спиртового (1,6%) раствора бромкрезолового пурпурного (можно
бромкрезолового синего), нагревают до 80°С и устанавливают активную кислотность
(7,1±0,1) ед рН, проверяя значение на рН-метре. Затем среду кипятят (5±1) мин,
фильтруют и доливают до первоначального объема дистиллированной водой.
Добавляют 0,5-1% маннита, разливают по пробиркам с поплавками. Стерилизуют
автоклавированием при (115±1)°С в течение (15±1) мин.

6.2.5.6. Среда с
индикатором ВР и маннитом сухая промышленного производства.

Подготовку среды для посева
проводят согласно прописи на этикетке.

 

6.2.6.
Среды и реактивы для обнаружения плесневых грибов и дрожжей

 

6.2.6.1. Раствор
солодового сусла с массовой долей сухих веществ (7,5±0,5)%.

Сусло фильтруют через
фильтрованную бумагу, разливают в колбы и стерилизуют (30±1) мин в автоклаве
при (108±2)°С. Затем сусло декантируют. В сусле определяют массовую долю сухих
веществ ареометром-сахарометром. Сусло разбавляют водой до массовой доли сухих
веществ (7,5±0,5)%, разливают в колбы и стерилизуют при (116±1)°С в течение
(20±1) мин. Солодовое сусло можно заменить виноградным суслом, которое готовят
аналогично солодовому.

6.2.6.2.
Сусловый агар.

К 1,0 дм3
солодового сусла с массовой долей сухих веществ (7,5±0,5)% прибавляют 30 г
агара. Среду нагревают до полного расплавления агара и фильтруют через вату или
фильтровальную бумагу. Охлаждают до (50±5)°С и устанавливают активную
кислотность (3,6±0,1) ед рН с помощью молочной кислоты. Фильтрат разливают в
колбы и стерилизуют при (116±1)°С в течение (20±1) мин.

6.2.6.3.
Приготовление среды из сухого сывороточного агара "БФ".

К 1,0 дм3
дистиллированной воды прибавляют 60 г порошка агара сывороточного
"БФ", нагревают до полного растворения (при наличии осадка
фильтруют). Устанавливают активную кислотность (4,0-4,5) ед рН добавлением
молочной кислоты, разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при (121±1)°С в
течение (15±1) мин.

6.2.6.4. Среда для
определения дрожжей и плесневых грибов в молоке и молочных продуктах
промышленного производства *(4)
по ТУ 49 1059-84.

Среда готовится по прописи на
этикетке.

6.2.6.5.
Среда Сабуро.

К 1,0 дм3
дистиллированной воды добавляют 18 г агара и оставляют на 30 мин для его
набухания, затем 40 г мальтозы или глюкозы и 10 г пептона, нагревают до полного
растворения (при наличии осадка фильтруют). Устанавливают активную кислотность
(6,5±0,1) ед рН с помощью молочной кислоты. Разливают в пробирки или колбы и
стерилизуют при (116±1)°С в течение (20±1) мин.

6.2.6.6.
Среда с солодовым экстрактом.

К 1,0 дм3
дистиллированной воды добавляют 20 г солодового экстракта, 5 г пептона, 0,4 г
лимонной кислоты, 5 г сахарозы, 18 г агара. Среду плавят в автоклаве, поднимая
температуру до (120±1)°С (без выдержки). Давлению дают упасть, расплавленную
среду фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают и стерилизуют при
(115±1) С в течение (15±1) мин.

Среды хранят при температуре
от 4 до 6°С не более 14 суток.

Для повышения элективности
питательных сред 6.2.6.3-6.2.6.6 добавляют антибиотики в объеме, указанном в
табл.10.

Антибиотики готовят согласно
п.6.2.6.7-6.2.6.10.

 

Таблица 10

 ———————————————————————————————————————————————————————————————————————


|Объем        | Объем добавляемых к среде растворов
антибиотиков, см3   |

|питательной 
|—————————————————————————————————————————————————————————|

|среды        | пенициллин |стрептомицин  | неомицин 
| левомицетин     |

|—————————————|————————————|——————————————|———————————|—————————————————|

|980          |   
10      |     10      
|     -     |      -          |

|—————————————|————————————|——————————————|———————————|—————————————————|

|930          |     -      |      -      
|    70     |      -          |

|—————————————|————————————|——————————————|———————————|—————————————————|

|975          |     -      |      -      
|     -     |      25         |

 ———————————————————————————————————————————————————————————————————————


 

Водные растворы антибиотиков
готовят непосредственно перед использованием и вносят в расплавленную и
охлажденную до (46±1)°С питательную среду.

Среды с антибиотиками
хранению не подлежат.

6.2.6.7.
Приготовление раствора пенициллина.

Во флакон с пенициллином,
содержащим 500000 ЕД, добавляют 5-7 см3 стерильной дистиллированной