>Сухой питательный агар
промышленного про-

изводства (на основе
килечного гидролизата)           - 35 г

Экстракт кормовых
дрожжей (ЭКД)                       -
2,5 г

Глюкоза                                              
- 1,0 г

Вода
дистиллированная                                 - до 1000,0 см3

рН                                                   
- 7,0

     Стерилизация в автоклаве при (121±1)°С в
течение (20±1) мин.

 

6.2.1.2. Сухие питательные
среды промышленного производства по ТУ 49513-83 или по ТУ 10-02-02-789-177-94.

Подготовку сред для посевов
проводят согласно прописи на этикетке.

 

6.2.2.
Среды и реактивы для обнаружения бактерий группы кишечных

палочек и
эшерхий коли

 

6.2.2.1.
Среда Кесслер (с лактозой).

К 1,0 дм3  водопроводной воды добавляют 10 г
пептона и 50,0 см3  стерильной
желчи крупного рогатого скота. Смесь кипятят на водяной бане при помешивании
20-30 мин. Затем фильтруют ее через ватно-марлевый фильтр, добавляют 2,5 г
лактозы; доводят объем водой до 1 дм3. Устанавливают активную кислотность
(7,5±0,1) ед рН, используя 1 н растворы NaOH или НСl и проверяя значение рН на
потенциометре. Добавляют 4,0 см3  1%-ного
водного раствора кристаллического фиолетового, разливают в пробирки по 10,0 см3  или колбочки по 40,0-50,0 см3,
закладывают поплавки. Стерилизуют в течение (15±1) мин при (121±1)°С.

6.2.2.2. Сухая среда
Кесслер промышленного производства по ТУ 10.02.87.5.90.

Подготовку среды для посева
проводят согласно прописи на этикетке.

6.2.2.3.
Среды сухие Левина, Эндо.

Среды Левина
(эозинметиленовоголубой агар), Эндо промышленного выпуска готовят согласно
прописи, указанной на этикетке банок. Изготовленные и разлитые в стерильные
чашки Петри среды можно хранить при температуре (4±2)°С до 10 суток.

6.2.2.4.
Среда на индол.

10,0 г сухого
панкреатического гидролизата казеина (или 100,0 см3  жидкого панкреатического гидролизата
казеина с содержанием 500 мг аминного азота), 5 г хлористого натрия, 1 г
DL-триптофана растворяют в 1,0 дм3 
дистиллированной воды. Доводят активную кислотность (7,0±0,1) ед
рН 1 н растворами NaOH или НСl и измеряя значение рН на потенциометре,
разливают в пробирки по 5,0 см3, стерилизуют в течение (15±1) мин при
(121±1)°С.

6.2.2.5.
Среда Кларка.

Взвешивают 5 г пептона, 5 г
глюкозы, 5 г двузамещенного фосфорнокислого калия. Растворяют ингредиенты в
950,0 см3  дистиллированной
воды, устанавливают активную кислотность (6,9±0,1) ед рН, используя 1 н
растворы NaOH или НСl. Проверяют рН на потенциометре. Доводят общий объем до
1000,0 см3  дистиллированной
водой и при необходимости фильтруют. Разливают в пробирки по 5,0 см3,
стерилизуют в течение (20±1) мин при (115±1)°С.

6.2.2.6.
90%-ный раствор этилового спирта.

В колбу, емкостью 1000 см3, с
900,0 см3  96%-ного этилового
спирта добавляют 60,0 см3  дистиллированной
воды.

6.2.2.7.
Раствор индикатора метилового красного.

0,1 г индикатора метилового
красного помещают в мерную колбу, вместимостью 500 см3, растворяют в 300,0 см3  90%-ного раствора этилового спирта,
доливают до 500,0 см3  дистиллированной
водой. Хранят раствор в колбе с притертой пробкой при температуре (4±2)°С.

6.2.2.8.
0,5%-ный раствор бромтимолового синего в спирте.

Взвешивают 0,5 г
бромтимолового синего, помещают в мерную колбу, вместимостью 100 см3, и доводят
этиловым спиртом до метки. Раствор хранят при температуре (4±2)°С в течение
30-35 суток в колбе с притертой пробкой.

6.2.2.9.
0,5%-ный и 0,1%-ный растворы бриллиантового зеленого.

Для приготовления 0,5%-ного
раствора асептически взвешивают 0,5 г индикатора бриллиантового зеленого,
вносят в стерильную мерную колбу, вместимостью 100 см3, и доводят стерильной
дистиллированной водой до метки.

Для приготовления 0,1%-ного
раствора в стерильный мерный цилиндр или колбу к 10,0 см3  исходного 0,5%-ного раствора
индикатора добавляют 40,0 см3  стерильной
дистиллированной воды.

Растворы хранят в
холодильнике в течение 7-10 суток.

6.2.2.10.
1,6%-ный раствор бромкрезолового пурпурного в спирте.

Взвешивают 1,6 г индикатора
бромкрезолового пурпурного и количественно переносят в мерную колбу,
вместимостью 100 см3. Доводят 96%-ным этиловым спиртом до метки. При
необходимости фильтруют через бумажный фильтр. Хранят в колбе со шлифом в
условиях холодильника.

6.2.2.11.
5%-ный раствор альфа-нафтола.

Взвешивают 5 г альфа-нафтола,
растворяют в 100,0 см3  96%-ного
этилового спирта. Раствор готовят непосредственно перед применением.

6.2.2.12.
40%-ный раствор гидроокиси калия.

В стакане, вместимостью 100
см3, взвешивают 40 г гидроокиси калия, переносят в мерную колбу, вместимостью
100 см3, растворяют в 60,0 см3  дистиллированной
воды, затем доводят до метки дистиллированной водой. Раствор хранят при
температуре 4-6°С.

6.2.2.13. 1%-ный водный
раствор генцианового (кристаллического) фиолетового.

Взвешивают 1 г генцианового
(кристаллического) фиолетового, помещают в мерную колбу, вместимостью 100 см3,
и доводят до метки дистиллированной водой. Раствор хранят при температуре 4-6°С
в течение 7 суток.

6.2.2.14.
Реактив на индол (Эрлиха).

Взвешивают 5 г
пара-диметиламинобензальдегида в стеклянном стакане, вместимостью 100 см3,
помещают в коническую колбу, вместимостью 200 см3, и растворяют в 50,0 см3  этилового спирта. С помощью мерного
цилиндра, вместимостью 100 см3, медленно добавляют 50,0 см3  концентрированной соляной кислоты.
Раствор хранят в колбе с притертой пробкой при температуре 4-6°С.

6.2.2.15.
Среда Козера.

Взвешивают 1,5 г
натрия-аммония фосфорнокислого, 1 г калия фосфорнокислого двузамещенного, 0,2 г
магния сульфата, 3 г натрия лимоннокислого трехзамещенного. Растворяют в 950,0
cм3  дистиллированной воды,
добавляют 10,0 см3  0,5%-ного
спиртового раствора бромтимолового синего. Устанавливают активную кислотность
(6,8±0,1) ед рН растворами NaOH или НСl, проверяя значение рН на потенциометре.
Доводят объем дистиллированной водой до 1,0 дм3. Разливают по 10,0 см3  в пробирки, стерилизуют в течение
(15±1) мин при (121±1)°С.

6.2.2.16.
Среда Симмонса.

Среду готовят аналогично
среде Козера (п.5.2.2.15), но после измерения рН в нее добавляют 2 г агар-агара
на 1000 см3, прогревают на водяной бане до расплавления агара, стерилизуют в
течение (15±1) мин при (121±1)°С. Разливают в стерильные чашки Петри или
пробирки.

6.2.2.17.
Среда с 5% сахарозы.

В 1000,0 см3  дистиллированной воды растворяют 30 г
сухого питательного агара (по ТУ 42-14-33-75 или по ТУ 10-02-789-177-94) и 50 г
сахарозы. Стерилизуют в течение (30±1) мин при (112±1)°С.

 

6.2.3.
Среды и реактивы для обнаружения бактерий рода Salmonella

 

6.2.3.1.
Магниевая среда.

     Среду готовят из трех растворов *(1).

     1 раствор:

     пептон                                   - 4,2 г

     натрий хлористый                         - 7,15 г

     дрожжевой диализат или дрожжевой экстракт

     (ЭКД)                                    - 20 см3

                                               
или 2 г

     калий фосфорнокислый однозамещенный      - 1,42 г

     вода дистиллированная                    - 890,0 см3

     2 раствор:

     магний хлористый кристаллический

     (MgCl2 x 6H20)                           - 35,7 г

     вода дистиллированная                    - 90,0 см3

     3 раствор:

     0,5%-ный водный раствор бриллиантового

     зеленого                                 - 0,9 см3

После растворения всех
ингредиентов растворы соединяют, устанавливают активную кислотность (7,2±0,2)
ед рН, разливают приготовленную таким образом среду в колбы и флаконы. Среду
стерилизуют при температуре (112±1)°С в течение (30±1) мин.

6.2.3.2.
Дрожжевой диализат.

Взвешивают 1000 г свежих
хлебных (прессованных) дрожжей, размешивают в 1000,0 см3  дистиллированной воды в кастрюле до
состояния гомогенной массы, которую переливают в целлофановый мешок,
предварительно промытый дистиллированной водой. Мешок завязывают, обмывают под
струей питьевой воды, а затем дистиллированной водой и погружают в
эмалированную посуду, в которую предварительно наливают 1300,0 см3  дистиллированной воды. Мешок должен
быть полностью погружен в жидкость. Диализ ведут при температуре 60-80°С в
течение (6±0,5) ч. За это время количество жидкости в кастрюле должно
уменьшиться примерно в 2 раза. Затем жидкость из кастрюли переливают в
стерильную бутыль и добавляют хлороформ (0,5% к общему объему жидкости) и
сохраняют при 5-7°С до 7 месяцев.

6.2.3.3.
Среда Мюллера.

К 90,0 см3  стерильного мясо-пептонного бульона
добавляют:

- 4,5 г химически чистого
мела (СаСО3), предварительно простерилизованного во флаконе сухим жаром (при
160°С в течение 2 ч);

- 10 см3  раствора гипосульфита натрия (50 г
чистого кристаллического гипосульфита натрия в мерной колбе доводят до 100,0 см3  дистиллированной водой, стерилизуют
текучим паром в течение (30±1) мин);

- 2 см3  раствора Люголя (металлического йода -
25 г, йодистого калия - 20 г, дистиллированной воды - 100,0 см3).

После добавления указанных
ингредиентов смесь взбалтывают и разливают в необходимых количествах.
Допускается использовать среду в течение 7 дней после приготовления.

6.2.3.4.
Среда Кауфмана.

К 100,0 см3  среды Мюллера добавляют 0,2 см3  0,5%-ного водного раствора
бриллиантового зеленого и 5,0 см3  стерильной
желчи крупного рогатого скота. Приготовленную смесь стерилизуют текучим паром в
течение (30±1) мин. До стерилизации - среда зеленого цвета, после стерилизации
она приобретает зеленовато-коричневый тон.

6.2.3.5.
Приготовление селенитовой среды.

     6.2.3.5.1. Селенитовая среда
накопления Лейфсона *(2).

     Натрий кислый селенистокислый                 - 4 г

     Пептон импортный                              - 5 г

     Натрий фосфорнокислый двузамещенный           - 7 г

     Натрий фосфорнокислый однозамещенный          - 3 г

     Лактоза                                       - 4 г

     Дистиллированная вода                         - 1000,0 см3

Среду готовят из 2-х основных
растворов. Прежде всего экспериментально определяют точную пропорцию
двузамещенного и однозамещенного фосфата натрия, которая с используемым
образцом пептона и кислого селенистокислого натрия дает активную кислотность
(7,0±0,1) ед рН, что регулируется соотношением фосфатов. Такая предварительная
подтитровка производится всякий раз, когда меняется серия любого из входящих в
среду основных ингредиентов (пептон, кислый селенисто-кислый натрий, фосфаты).

После установления указанных
соотношений к приготовленному раствору фосфатов добавляют пептон и лактозу,
разливают во флаконы и стерилизуют текучим паром 2 дня по (30±1) мин или при
(112±1)°С однократно в течение (30±1) мин.

Отдельно на стерильной воде
асептически готовят 10%-ный раствор кислого селенита натрия. Перед началом
работы на каждый флакон с 50,0 см3 основного раствора добавляют 2,0
см3 раствора кислого селенита натрия. Приготовленную среду разливают
в необходимых количествах в стерильные пробирки или колбы, плотно закрывают
приготовленными пробками.

6.2.3.5.2.
Селенитовая среда сухая.

Селенитовую среду
приготавливают согласно прописи на этикетке.

6.2.3.6.
Среды Плоскирева и висмут-сульфитный агар.

Среды Плоскирева и
висмут-сульфитный агар (ВСА) промышленного производства выпускаются в сухом
виде. Их следует готовить согласно прописи, указанной на этикетке банки.
Изготовленные и разлитые в стерильные чашки Петри среды можно хранить в
холодильнике до 10 суток.

6.2.3.7.
Трехсахарный агар с мочевиной (среда Олькеницкого).

Трехсахарный