подавляющее дегидрогеназную активность клеток тест-культуры, на минимальную
концентрацию антибиотика контрольного ряда стандарта, вызывающего тот же
эффект, т.е. 0,07х8=0,56 ЕД/мл. Таким образом, в испытуемом субстрате
содержится 0,56 ЕД/мл пенициллина.

 

3.6.
Качественное определение антибиотиков

 

Качественное определение
антибиотиков в пищевых продуктах можно проводить по вышеописанной методике.
(3.5)

 

3.6.1.
Проведение анализа.

 

Подготовленные к исследованию
испытуемые пробы (см. 3.1.1) в объеме 0,5 мл вносят в пробирки с таким же (0,5
мл) количеством мясо-пептонного бульона и тщательно перемешивают. Во все
пробирки добавляют 0,5 мл взвеси, содержащей двойную "рабочую дозу"
тест-культуры.

Последняя пробирка не
содержит испытуемого субстрата и служит контролем ферментативной активности
тест-культуры.

Пробирки встряхивают и
помещают в термостат на 3-часовую экспозицию тест-культуры с испытуемым
субстратом.

После этого в каждую пробирку
вносят по 2 мл растопленного и охлажденного до (45+-1) °С мясо-пептонного агара
с метиленовым синим и глюкозой. Содержимое пробирок смешивают и вновь
инкубируют в термостате при температуре (37+-1) °С в течение 1-2 ч.

 

3.6.2. Учет
результатов.

 

1. При отсутствии в
испытуемых образцах антибиотика дыхательные ферменты бактериальных клеток
тест-культур не нарушаются и восстанавливают (т.е. обесцвечивают) в анаэробных
условиях метиленовый синий.

2. В контрольной пробирке,
где нет испытуемого образца также происходит обесцвечивание в течение 1-2 ч
наблюдения в термостате при температуре (37+-1) °С (контроль ферментативной
активности бактериальных клеток тест-культуры).

3. При наличии антибиотика в
испытуемом образце дыхательные ферменты бактериальных клеток блокируются,
метиленовый синий не восстанавливается и пробирки не изменяются, цвет их
остается синим.

4. Параллельно в качестве
второго контроля можно использовать субстраты, содержащие определенную
концентрацию антибиотика.

 

3.7.
Растворы, применяемые для разведения стандартов антибиотиков и

испытуемых
образцов, реактивы

 

3.7.1.
Бензилпенициллин.

 

Основной раствор стандарта,
рабочие разведения стандарта и испытуемый раствор готовят на буфере N 1 - 0,066
М фосфатный (pH 6,8-7,0).

Рецепт:

Калия фосфат однозамещенный -
3,63 г;

Натрия фосфат двузамещенный -
7,13 г;

Вода дистиллированная - до
1000 мл.

 

3.7.2.
Стрептомицин сульфат.

 

Основной раствор стандарта
готовят на буфере N 3 0,066 М фосфатный (pH 6,0-6,2).

Рецепт:

Калия фосфат однозамещенный -
7,72 г;

Натрия фосфат двузамещенный -
1,78 г;

Вода дистиллированная - до
1000 мл.

Рабочие разведения стандарта
и экстракцию испытуемых образцов готовят на буфере N 4 - 0,066 М фосфатный (pH
7,8-8,0).

Рецепт:

Калия фосфат однозамещенный -
0,68 г;

Натрия фосфат двузамещенный -
10,99 г;

Вода дистиллированная - до
1000 мл.

 

3.7.3.
Тетрациклины.

 

Основной раствор стандарта
растворяют в 0,01 Н соляной кислоте (HCI).

Рабочие разведения стандарта
и экстракцию испытуемых образцов готовят на буфере N 2 - цитратно-солянокислый
(pH 5,8-6,0).

Рецепт:

Натрия цитрат трехзамещенный
- 20,6 г;

Соляная кислота
концентрированная - 1,81 мл;

Вода дистиллированная - до
1000 мл.

 

3.7.4.
Мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА).

 

Производят согласно ГОСТу 9225-84;
ГОСТу 18963-73.

 

3.7.5.
0,5%-ный водный раствор метиленового синего.

 

3.7.6. 40%-ный коммерческий раствор глюкозы.